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[size=2][font=黑体]我的做法是先逆转录再荧光定量pcr!
逆转录使用特异性引物(u6的反向引物)。
u6,also as know RNU6A,RNU6B,分别对应 RNU6-1,RNU6-2,
U6 F
2015年06月01日发布人:园丁##
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[size=5][font=新宋体][b]RT-PCR讨论区 [转载]
大家做RT-PCR的比较多,我认为有必要建立一个专区,这样大家能在这里有目的地交流。现搜集了一些帖子,供大家学习参考,更欢迎同胞们踊跃提问,积极发言~希望
2014年04月23日发布人:荷塘青蛙!
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2.SYBR Green PCR:
反应体系:Master Mix:12.5微升
RNase-Free H2O:7.9微升
模板:0.5微升
10微mol Primer各1.8微升
UNG:0.5微升
total:25微升
2011年09月23日发布人:楚留臭
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的正向引物,反向引物也是试剂盒配的通用引物。内参选用U6,现在的问题是我的U6的引物应该只加正向引物然后反向用通用的引物吗?
实验的过程中发现待测的miRNA曲线都有出来,我的U6加特异性正向引物和通用反向引物,曲线跑不出来,当我改成U
2015年11月07日发布人:dotaaa
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[size=2]千万不要买TAKALA的LA Taq,上当了,说是高保真,质量奇差,拉1.5KB的序列,挑3个克隆测序,有15个突变位点,狂晕。[/size],[size=2]呵呵,LA Taq本来就是用来扩增长片段的,并不是保真性DNA
2015年06月03日发布人:txwuyan
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[size=4][color=Black]PCR 95度完全变性10分钟后再Taq酶者请来交流一下 [转载]
本人摸索PCR近半月苦于没有结果或特异性条带瞪大眼才偶见,再改变了循环方式后轻松扩得特异性清晰条带,怪!可能是先加酶者
2011年10月05日发布人:purrr
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[size=2][color=Black]本人做过几年的定量PCR,有一定的经验。看到版里头有许多战友对定量有许多问题。愿意就定量PCR的问题与各位战友一起探讨。
[/color][/size],[size=2][color=Black
2014年07月29日发布人:挖挖挖
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我的体系:
DreamTaqpcr Master Mix(含dNTP、缓冲液和Mg离子的) 25ul
上游引物(10uM
2015年04月30日发布人:dog002
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公司的Proofstart Taq酶(基因公司代理),该酶是热启动+高保真。可以扩增出很难扩出的片断。扩增出的PCR产物用PCR gel extraction kit(qiagen公司)胶上回收后,产物加入ATP 2ul,bufter及
2011年09月16日发布人:mamamiya
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各位站友[b][/b],多日以前,曾遇到一位朋友,让我来这和大家交流交流一些分子生物学的经验,一时太忙,落下了,今日在这开一贴,欢迎大家交流[/size],[size=2]不知群里是否有做多重PCR的兄弟姐妹,在这里想
2014年09月26日发布人:@STAR@