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],[size=2][color=Black]蛋白浓缩方法基本有:
丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸铵沉淀法;(低温)有机溶剂沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超滤法;透析法;离子交换层析和冷冻干燥法……
1,丙酮沉淀法;三氯醋酸
2013年08月01日发布人:nn255
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[size=2][color=Black]组织样品提取蛋白,丙酮沉淀4小时,13cmIPG,IEF电压达不到8000,最多为6800,银染后胶上半部分染色很重,是什么原因呢?[/color][/size],[size=2][color
2014年06月18日发布人:cj_mondy
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(6)加入50 μL 提取液D, 混匀、静置30 min 后, 100℃变性5 min, 自然冷却, 该溶液即为含有HMW-GS 和LMW-GS 的提取液;
(7)在上述150μl上清液中加入600μl预冷丙酮沉淀1 h;
(8
2013年11月19日发布人:ffooll
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盐桥(无明显改善)
2、样品除盐,用丙酮沉淀,或者采用2D cleanup kit
3、重新提取蛋白,并严格控制引入的盐离子(强烈推荐)[/color][/size],[size=2][color=Black]
对盐离子的去除我想
2014年03月12日发布人:txwuyan
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[size=2][color=Black]
昨天做了一次细菌全蛋白的2D图。样品处理方法是:超声波裂解细胞后TCA/丙酮法沉淀除杂质,再裂解液处理得上清。所得上清用于2D。IEF时水化13hr,聚焦5hr。结果图上出现了很严重的水平条纹
2014年06月10日发布人:cwcwcww
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[size=2][color=Black]
我的样品是细菌蛋白,超声裂解,40w, 5s/5s, 10min,丙酮沉淀。
IEF条件: 胶条pH 4-7,13cm,实际Vmax=8000v,V*h=45000,聚焦结束胶条两端有变黄
2013年12月16日发布人:chengjie79
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请问粗多糖提取出来是固体么?为什么烘箱干燥完了它是呈油状贴在瓶底呢?
在无水乙醇、丙酮洗涤沉淀以后干燥以前不小心混了点水进去~是不是这个的影响?
[[i] 本帖最后由 miracle 于 2010-10-11 17:25 编辑 [/i
2010年10月16日发布人:vera36zoe
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[size=2][color=Black][font=黑体]
我做的是一种革兰氏阴性菌的双向电泳,已经做了很长时间了,每次电泳点都不是很多,该怎么办啊?
(样品处理:TE缓冲液重悬菌体,超声波破碎,高速离心,核酸酶处理,丙酮沉淀
2014年04月05日发布人:dreaming
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][color=Black]
上清可以不用浓缩的,直接加loading buffer跑page,如果表达量不高的话,根据蛋白分子量做超滤浓缩,没有超滤浓缩的话,用丙酮沉淀浓缩。如果可以的话,用wb检
2014年06月09日发布人:mamamiya
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%PVP、1mM PMSF、2%巯基乙醇、50mM EDTA
操作是液氮研磨成粉,加入提取液冰浴提取30min,后离心取上清液
*问:如果至此就直接作为2D-PAGE的样品可以吗?
我后面也做过提纯,用4倍丙酮-20度沉淀蛋白2次,但每次
2014年06月10日发布人:JK.jon