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[size=2][color=Black][font=黑体]做的蛋白分子量为52KD、70和80KD,湿转,Bio-Rad Basic转膜仪,转膜液中加20%甲醇,不加SDS,膜是0.45um PVDF膜。。。。求问有经验的朋友推荐转膜
2013年04月20日发布人:jude
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Transwell技术作为细胞生物学的常用实验方法,在生物医学研究领域有着极其广泛的应用。
虽然只是一个带有通透膜的小杯,transwell却在免疫、药理、肿瘤等多方面的研究中
2012年04月09日发布人:园丁##
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电转液可以用来吸收转膜过程中产生大量的热。在电转化过程中,处于直流电作用的电转缓冲液 在电极周围发生电解,由于电转缓冲液成分复杂,电解产 生许多离子,会破坏电转体系的稳定。
你的电转
2014年02月15日发布人:bs4665
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不含SDS的啊[/color][/size],[size=2][color=Black]
小分子量的蛋白一般不加sds防止过转,实际上我做实验用的电转液一般都是不加sds,55kd我一般用150mA,1.5小时左右,膜的面积一般20cm2
2014年05月10日发布人:misswu61
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?另外大家用恒压转膜时,电流有多大?我放了冰,电流也有300mA左右(用的Bio-Rad电泳仪)。[/color][/size],[size=2][color=Black][font=Verdana]
电流太大了吧。用恒流转的话180MA
2014年06月04日发布人:=菓子=
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做WB大半年了,一直出不了好的结果,有时甚至就是白片出来,真是郁闷!再者就是转膜了,用200MA恒流时,有时电压比较低,只有30+V,有时电压还好,有80+V,时间一般用
2014年01月24日发布人:张先生
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,不同的厂家的仪器,是不是转膜的电压也不相同呢?[/color][/size],[size=2][color=Black]我也经常做WB的,我用的是BIO-RAD的仪器,转膜100V,60-70min就足够了,加冰盒防热[/color
2014年02月07日发布人:DONT
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高分子量MARKER也没有转上,真是晕。操作应该没有太大问题的。大家帮帮我啊,谢谢了!![/color][/size],[size=2][color=Black]
你的电转条件是湿转还是半干,如果是湿转,试试变换一下转膜条件,注意一下电转液
2014年07月01日发布人:docsy
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beta-actin 为43kd ,用的是湿转,200MA 1h, NC膜,可以成功将蛋白转到膜上,今天用的是pvdf膜,0.22um孔径,同样是湿转 200MA 1h,结果转膜后丽春红染膜
2014年02月22日发布人:小野花
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小弟用bio-rad转膜槽,PVdF膜,转1个17kd的小蛋白,用过400mA,10min;300mA,40min。2个条件转过,ecl显色效果均未见条带,抗体
2013年11月24日发布人:cwcwcww