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,调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL。将细胞悬液分至冻存管内,每管1~1.5mL,拧紧盖子。在管壁上做好标记,标明细胞名称、冻存日期等。(细胞冻存液配方可为胎牛血清:培养基:DMSO=4:6:1或胎牛血清:培养基:DMSO
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/ml~1牙周107/ml; 6. 将体细胞分装进冻存管中,每管1~1.5 ml; 7. 在冻存管上标出体细胞的名字,冻存時间及作业者; 8. 冻存:标准的冻存程序流程为减温速度-1~-2℃/min;当溫度达-25℃下列时,可升至-5
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细胞。二、操作步骤(一)冻存1、消化细胞,将细胞悬液收集至离心管中。2、1000rpm离心10分钟,弃上清液。3、沉淀加含保护液的培养,计数,调整至5×106/ml左右。4、将悬液分至冻存管中,每管1 ml。5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则
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,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。加入1ml冻存液(90%血清,10%DMSO),放入冻存盒内(盒内有异丙醇,以保证温度降低的速度),立即放入一80℃冰箱内,过夜,第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放入液氮,可以保存三个月。 冻存液的配制:70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。
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,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)最好;或者可以
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的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.这是我实验中用的protocol,
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无菌的,如果实验要求较高就要购买无菌和无DNA,RNA的冻存管。另外如果是新买的,没有在外面打开,可直接使用,如果在外面打开过,就高压一下。目前市场上冻存管种类繁多,各个厂家生产的冻存管规格和材料不一样其价格差距也较大,但一般来说进口的比国
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细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中,及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中,杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。因为在没有建立一个
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一:进口冻存管的概况和特点: 1、冷冻管采用医用聚丙烯(PP)为原料,是专用于储存生物样本的一次性实验室耗材。在液氮的气体状态环境下,可耐低温至 2、零下187℃。独特的外旋设计避免了交叉污染的可能性。管帽内装有硅胶垫以避免液体泄漏
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提蛋白时加入裂解液后一般不可以不离心即冻存的加入裂解液后,细胞就会裂解,之后各种蛋白酶都会激活。放一段时间很多丰度不高的蛋白就检测不到了,即使是冻存但是在冻上(液氮除外)和冻融的过程中,不能保证所有蛋白酶都不发挥活性。所以提蛋白时加入裂解液后一般不可以不离心即冻存的