-
[size=2][color=Sienna]我的蛋白是包涵体,溶解在8M尿素中,用8M尿素和pH8.5Tris-HCl作为平衡液和上样Load,然后在平衡液中加入NaCl洗脱,但是在NaCl浓度达到1.5M时仍有大量蛋白未被洗脱。曾优化过
2013年05月25日发布人:standbyme
-
尝试了包涵体蛋白的纯化。
在包涵体洗涤过程中,当洗涤液中带有2M 尿素时,会有大部分沉淀被溶解;当洗涤液中有2M盐酸胍时,沉淀基本溶解,所剩无几。
我想请教各位,这种情况是形成了包涵体吗? 我查了一些资料都是用8M尿素或6M盐酸胍
2013年06月05日发布人:fei1226com
-
,6M尿素,10mM Nacl,洗脱液:50mM PB,6M尿素,0-1M Nacl梯度洗脱,PH为6.5,包涵体溶解液:50mM PB,8M尿素,5mMβ-ME,PH为6.5,我的离子交换柱可装填料25ml的样子。[/b][/color
2013年12月07日发布人:969
-
重悬后37℃水浴30min,取样电泳,蛋白条带有3条,即蛋白被降解;
注:1、2菌悬液中均加了1mM的PMSF、5mMEDTA、2mMβ巯基乙醇。
3.综上,决定采用变性纯化法,即先用含8M尿素的缓冲液充分重悬菌体,超声破菌,去上清及
2014年01月06日发布人:superboy
-
[size=2][color=Black]
我做原核表达,蛋白在包涵体中,我用尿素溶解后,过NI柱,然后把过完柱的样品用超滤管超滤,将溶解液换成生理盐水,准备打兔子,制抗体。但是在超滤的过程中,蛋白都沉淀了下来。该怎么解决呢?哪位专家
2014年01月18日发布人:bs4665
-
[size=2][color=Black]
我目前纯化一个His标签的蛋白,Ni-NTA柱子纯化的,用的8M尿素变性,复性梯度为6M,4M,2M,1M,但是复性过程中,到了2M的梯度时出现很多沉淀,试了几次都是如此,透析蛋白的浓度在
2014年01月17日发布人:cj_mondy
-
[size=2][color=Black][font=Verdana]
最近,我用pET-32a载体表达25KD的蛋白,载体本身20KD,经鉴定目的蛋白存在于包涵体中,在纯化过程中,先用pH为8.0的8M尿素,0.1MNaH2PO4
2014年06月08日发布人:u234
-
[color=Black][size=2]
本人有一蛋白,包涵体形式存在,分子量16.7KD,等电点7.6
1.阳离子柱CMFF纯化,将蛋白溶解在9M尿素中,调PH=4.0,BufferA,B,C的PH=4.0,过柱子后,蛋白大部分
2014年01月22日发布人:misswu61
-
迁移率有一定差别,在带型判定上会引起混淆
2.普通聚丙烯酰胺凝胶电泳的有效分辨率只有在凝胶浓度达到20%时,分辨率才能达到10bp,但此时的分辨范围只有10bp-100bp,恐怕不能达到实验要求。
建议使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,即加入8M尿素的聚丙烯酰胺凝胶,尿素可使DNA双链打开全部呈单链状态,消除了构象带来的
2016年03月03日发布人:caihong
-
[size=2][color=Black][font=黑体]
大家好,我用AKTA的机器纯化蛋白。表达菌株是全式金的Rosset(ED3),表达载体是pet30。
目的蛋白以包涵体形式表达、得到包涵体以后,经过2M的尿素和
2013年12月14日发布人:shanzhapia696