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你的同学转膜,有淡淡的marker带,那说明仪器的装配应该没有问题的。不知道你的电转缓冲液的配方是什么?还有电转时间是不是以前摸索出来的?正常的Marker,转1h多一点就差不多了,当然也还取决于你的
2013年05月13日发布人:雪花子
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[size=2][color=Black]最近学做western blot, 实在不顺利。主要是背景太暗,怎么办呢?
我们是买的蛋白为抗原,一抗是人血清,二抗是羊抗人的。蛋白跑电泳然后转膜,丽春红染色,晾干,切条,然后每条用不同的
2013年12月01日发布人:子衿青青
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=Impact]缓冲液没对吧,我们都只用15分左右就足够了
Western transfer using a semidry apparatus
[url]http://grimwade.biochem.unimelb.edu.au
2013年10月26日发布人:skytree
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做WB大半年了,一直出不了好的结果,有时甚至就是白片出来,真是郁闷!再者就是转膜了,用200MA恒流时,有时电压比较低,只有30+V,有时电压还好,有80+V,时间一般用
2014年01月24日发布人:张先生
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要用分泌型蛋白做Western blot,想加药物刺激后分别从细胞的和细胞上清液中提取蛋白。但不知道细胞上清液提取蛋白的具体方法,好像还需要浓缩。谁做过的,可不可以分享下经验。最好有具体的
2013年04月11日发布人:dhpbj
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浓缩胶60V,分离胶120V,转膜100V,1.5h,5%脱脂奶粉封闭2h,一抗4℃过夜(Abcam,1:1000),二抗常温1.5h(1:15000 jackson),由于我预实验跑出来的背景较深,我洗膜都是15min,4次。发光液用的是
2013年10月29日发布人:吉吉0120
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求大神们指点迷津!
最近做western blot 总是显不出目的条带,貌似有严重的拖尾现象,我做的是组织的,不知道是什么有原因,还请各位高手指点一二,非常感谢!
组织是:脑海马和杏仁核
2013年04月05日发布人:周伯通pp
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我刚学习western blot技术听说PVDF 膜需要活化,可是不知道活化时间怎么掌握,用什么活化效果较好?急却想知道相关的内容!期待知晓者给以答复,在此先谢谢
2014年01月23日发布人:TNT
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western 湿转恒流好还是恒压好啊,我做western一直用的是恒压,转两个膜后考染胶总是一个有残余蛋白条带一个没有,是不是恒压不好啊,这两种方法哪个好啊?[/color][/size
2014年05月20日发布人:vera+
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转移缓冲液甲醇浓度(NC膜可加到20%,PVDF加到15%),有区别嘛?我只知道小分子量的蛋白要加甲醇,我们用的PVDF膜也加的20%啊。[/font][/color
2013年05月25日发布人:ssonglikihi