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(还剩1ml做对照),加iptg(manual上说是到1mM,我也试过不同的浓度,比如0.5mM),继续诱导(温度37,我也试过28,20)3个小时以上(久一点应该没有影响吧),然后收集对照和诱导后的菌体,加loading buffer,沸水
2014年03月27日发布人:rxcc33
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重组质粒测序结果正确无移码,但37°C 诱导表达后,诱导带位置居然与空载相同,降低温度到16°C ,发现在目的带位置有带,但随着诱导时间的延长,目的带越来越淡,而空载诱导带相同的地方的带却
2023年08月18日发布人:TAT
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我现在在做一个跨膜蛋白的原核表达,载体是PGEX-4T-2,膜蛋白大小是64KD,菌株:BL21,我改变了诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度,但仍然没有表达,测序证实读码框是正确的。 同时空质粒
2013年10月27日发布人:爱老虎游tt
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大片段的阳性也是转了好几次才挑出来,指望最后一步一起诱导大丰收的,结果IPTG诱导后六个片段一个都没有表达(做了阴性对照),相当的郁闷,几天的熬夜到最后一步却是如此结果,谁能告诉我为什么。我到底错在哪里啊?(仰天长叹状)[/font
2014年05月31日发布人:尘朵朵
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基质干细胞BMSC是一回事么?
如果是,我也算一个。多交流啊,大家![/color][/size],[size=2][color=Black]
我有个问题,骨髓间质细胞向成骨细胞诱导时,要加维生素C,但是Vc在培养液的PH值好象是很不
2012年09月12日发布人:铜雀
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最近做的载体用的是PET28a的载体,但是用37度试着诱导了却没有目的带。转化的菌种是rosetta(DE3)。不知道原因。能不能帮我分析一下?
是不是需要换个载体?如果
2014年01月24日发布人:langlang
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小弟在做原核表达。用的是pet-28a和BL21(DE3)。OD0.5-0.6时开始诱导,IPTG浓度有1mM 0.5mM 0.1mM 0.05mM 0.01mM,诱导温度有37度,30
2013年04月24日发布人:star#room
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[size=2][color=Black][font=黑体]表达一个哺乳动物病毒的N蛋白
克隆到载体上后
开始用BL21表达
虽然量不是很大 但还可以接受
-80保存了两三个月
再拿出来划线 挑菌 诱导 同样的条件居然不表达了
2014年03月17日发布人:xevin
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我做的克隆表达目的片段与载体连接后酶切及PCR鉴定都是正确的,为什么表达量特别小呢,只见一条细线,大小应该是表达的融合蛋白,我优化过诱导时间,IPTG浓度,诱导温度但都无变化,我还换过几次载体
2013年07月20日发布人:bananapeople
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马上要在pGEX-4T-1中表达一个4.3KD的蛋白,不知道这个载体它的表达体系是不是和PET系列的类似,具体表达所用的温度啊,AMP的浓度,IPTG的浓度,诱导时间等等相关问题应该怎么把握
2014年02月09日发布人:docsy