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中和溶液30分钟。如果使用尼龙膜杂交,本步可以省略。 (4) 戴上手套,在盘中加20×SSC液,将硝酸纤维素滤膜先用无菌水完全湿透,再用20×SSC浸泡。将硝酸纤维素滤膜一次准确地盖在凝胶上,去除气泡。用浸过20×SSC液的3滤纸盖住滤膜
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一、核酸探针预杂交预杂交的目的是用非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其他高分子化合物(Denhart’s溶液)将待测核酸分子中的非特异性位点封闭,以避免这些位点与探针的非特异性结合。杂交反应是使单链核酸探针与固定
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Tm值。第三,一次可大量合成寡核苷酸探针,使得这种探针价格低廉,与克隆探针一样,寡核苷酸探针能够用酶学或化学方法修饰以进行非放射性标记物的标记。最常用的寡核苷酸探针长18—40个硷基,目前的合成可有效地合成至少50个碱基的探针。 对于合成的
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影响其使用浓度,但受不同类型标记物的固相支持物的非特异结合特性的影响。(四)杂交率在探针过量的条件下,杂交率主要依赖于探针长度(复杂度)和探针浓度。(五)杂交最适温度杂交技术最重要的因素之一是选择最适的杂交反应温度。若反应温度低于Tm 10
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鲑鱼精子DNA或酵母DNA,并和SDS一起使用。与Denhardt's试剂相比, BLOTTO价格便宜,使用方便,同样可获得满意的结果,但它不能用于RNA杂交。一般而言,尼龙膜用Denhardt's试剂比用BLOTTO能得到
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核酸分子杂交可分为液相杂交和固相杂交。1.液相杂交液相杂交是让DNA探针和待测核酸在溶液中进行反应。在溶液中,待测核酸和探针均自由运动,增加了两者结合的机会,因此液相杂交要比固相杂交快5~10倍。但液相杂交不易分离杂交体和游离核酸探针
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【原理】Southern杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中
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检验检测机构通用要求如下:1、检验检测机构应是依法成⽴并能够承担相应法律责任的法⼈或者其他组织。检验检测机构或者其所在的组织应有明确的法律地位,对其出具的检验检测数据、结果负责,并承担相应法律责任。不具备独⽴法⼈资格的检验检测机构应经所在
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最适温度
杂交技术最重要的因素之一是选择最适的杂交反应温度。若反应温度低于Tm
10~15℃,碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链,错配对减少。若反应温度再低(Tm-30℃),虽然互补链之间也可形成稳定的双链,但互补碱基配对减少