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贴壁不太紧的细胞如293,可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO,则需要以胰酶消化后再吹散分瓶,一般过程为 (以下操作均按无菌操作的要求进行):
• 将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去;
• 加入0.25%胰酶
2012年06月19日发布人:小野花
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本人为一新手,请教各位同道,细胞传代时胰酶消化后终止消化需要将胰酶倒掉吗还是直接加培养基(含10%血清)终止消化,谢![/b][/color][/size],[size=2][color
2012年05月28日发布人:S6044
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呵呵,不知楼主你养的是什么细胞?原代的还是肿瘤细胞系?你是用胰酶消化后传代吗?如果是的话,你可以适当缩短消化时间试试,也可以加0.02%的EDTA来帮助消化,可以缩短消化的时间。[/color][/size],[size=2
2012年05月21日发布人:@STAR@
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。[/size],[size=2]
难道是胰酶消化时间的问题?其他步骤没有错误,消化时间也控制了,为什么还是不行?[/size],[size=2]
我觉的是你的胰酶用法不当。我们用柠檬酸胰酶,感觉效果特别好。
没贴壁的细胞肯定已经死了
2014年11月01日发布人:utt0989
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我最近养原代胰腺干细胞,用0.5%FBS无糖培养液纯化4周后,加入扩增培养液细胞已长满并出现小的细胞集落。本准备将细胞消化后传代,但是用0.25%胰酶(胰酶已验证未失效)37度
2012年05月15日发布人:zwsyrt
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inhibitor cocktail (Roche).
胰酶消化收集细胞(不知道胰酶对磷酸化有无影响),每10×6个细胞加100μl细胞裂解液,超声破碎,3×15秒,12000rpm,4°c,10min,收集上清。
所有操作都在冰上进行,且快
2014年05月10日发布人:3648755
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我想请教一下:我的细胞贴壁长得很好的,可是我用胰酶消化完后肉眼发现成条,团,显微镜下看确是细胞团,也吹打不开,那是怎么回事啊?难道消化时间不够,可是细胞已从壁上脱落了呀?有谁懂,告诉我呗
2012年08月22日发布人:remenb
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很正常,再过2-3天就可以长很多了,5-6天就汇合的很好了[/color][/size],[size=2][color=Black]请问 楼上 成骨细胞原代培养多久能贴壁?我用胰酶消化20分钟,胶原酶2小时,为什么细胞一天都不贴壁
2012年06月16日发布人:二丫头466
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这是T-25的瓶子。一般最少要加5ML培养基,最多不超过10 ML。[/size],[size=2]
我们一般是加5-6ml[/size],[size=2]我们平时加培养液为5-7ml,最多不超过10ml,不知道你是用胰酶消化还是用什么
2015年02月25日发布人:vera+
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从25cm2细胞瓶中提取步骤:
1、PBS洗2次。
2、胰酶消化细胞,加4度培养液5ml中止反应。
3、3000rpm 离心5min(4度),去上清。
4、加入裂解液
2013年06月08日发布人:fox_79