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我一般挑出菌落液体培养基要10个小时以后再拿菌液做PCR,直接那菌落出现这种情况个人感觉有可能是挑的菌落中的菌太多,直接跑出来细菌的质粒或者基因组[/size],[size=2]
你挑单克隆把菌摇起来以后,用菌液做PCR试一下
2015年03月11日发布人:iii_ii
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为什么大肠杆菌菌液可以直接pcr?不需要先破坏细胞壁么?[/font][/size],[size=2]
这个是菌落PCR,不用事先处理菌液的,我认为PCR的94℃就能破坏它的细胞壁吧,个人
2015年04月30日发布人:birdfish
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就是表达宿主工程菌为啥一般不提质粒验证,而是做菌落或菌液PCR验证的原因吧,个人看法,呵呵
感受态只不过是这些宿主菌的经过处理,细胞壁(cell wall)破裂,从而让外界DNA片段能够有机会进入。,学会看基因型,尤其当你表达时,选择合适
2015年08月31日发布人:xiaoxiaojinglin
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就是表达宿主工程菌为啥一般不提质粒验证,而是做菌落或菌液PCR验证的原因吧,个人看法,呵呵
感受态只不过是这些宿主菌的经过处理,细胞壁(cell wall)破裂,从而让外界DNA片段能够有机会进入。,学会看基因型,尤其当你表达时,选择合适
2016年03月16日发布人:冰激凌
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就是表达宿主工程菌为啥一般不提质粒验证,而是做菌落或菌液PCR验证的原因吧,个人看法,呵呵
感受态只不过是这些宿主菌的经过处理,细胞壁(cell wall)破裂,从而让外界DNA片段能够有机会进入。,学会看基因型,尤其当你表达时,选择合适
2015年05月09日发布人:小女人@
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一出现假阳性,建议菌液PCR[/size],[size=2]
容易出现[/size],[quote]原帖由 [i]jujuba[/i] 于 2014-8-27 15:59 发表 [url=http://bbs.antpedia.com
2014年08月27日发布人:caihong
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大家好,最近我送样去公司测序,结果是都有重叠峰,测序失败,但是我在测序之前做了菌液PCR和双酶切都有我的目的基因(而且条带都是很亮的),这是怎么回事呢?,重叠峰有两种原因
一种是引物不特异,所以有重叠峰,另一种原因就是菌不纯,菌液里
2009年01月19日发布人:notrjhn
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[size=5][font=新宋体][b]RT-PCR讨论区 [转载]
大家做RT-PCR的比较多,我认为有必要建立一个专区,这样大家能在这里有目的地交流。现搜集了一些帖子,供大家学习参考,更欢迎同胞们踊跃提问,积极发言~希望
2014年04月23日发布人:荷塘青蛙!
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][/size],[size=2]
跑菌落PCR
我们通常是这样做的哈 取2微升或1微升菌液作为PCR的模板。体系跟你的差不多哈 根据我做的情况 体系对PCR的结果没有多大的影响哈 。我们都不加溶菌酶来溶解细菌的细胞壁 因为在PCR反应的时候 预变性的温度95℃或94℃足以破坏细胞壁使得基因组裸露出来 作为PCR反应的模
2015年01月14日发布人:大大大山楂
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融合载体
起初我也查到相关菌落pcr的文献,和导师商量,导师一口回绝了
他的理由和我所搜集到的理由一样:假阳性
我们实验室一博士师姐需要做一个真核表达载体
挑选了60个菌落,运用目的基因的上下游引物做PCR,出来条带的
2015年03月10日发布人:queen