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[size=2][color=Black][b]
为什么我在做细胞融合时,滴加完PEG,无血甭培养基终止后,会出现小的片状,碎渣子状的东西,是不是杂交瘤细胞与脾细胞破了?而且融合率都不高,大约20-30%,为什么?[/b
2012年02月24日发布人:wmp1234
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游有什么好办法呢 谢谢赐教[/color][/size],[size=2][color=Black]你的两条带,如果確定一条是GST,一條是融合蛋白的话,
可以把GST融合蛋白用Thrombin凝血酶切掉之后,再过一次GST柱,收穿透液了。
GST总会有些滲漏表達的。我感覺。[/col
2014年05月12日发布人:TAT
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,并做了浓度梯度。
2,可溶性表达,且表达出的融合蛋白大小与预期相符。
3,测定活性的体系借鉴在其他相近的嗜盐古菌中成功的体系。
问题:
1,如果要得到有活性的酶,应该采取什么措施?或者可以尝试什么方法?
2,采取亲和柱纯化时,是否
2014年03月07日发布人:cbou876
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包被的培养瓶中, 37 ℃, 5 %CO2 培养箱中静置培养。约6 - 7 天细胞基本融合成片后, 用01125 %胰蛋白酶+ 0102 %EDTA 消化, 进行传代。[/color][/size],[size=2][color=Black]非常感谢!请问你们用
2012年06月08日发布人:黄花菜
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]可以先用低浓度GSH预洗,3-5mM,然后再用10-25mM GSH洗脱
不过看你的电泳图,26kd处有两个条带,很可能是GST的片断
你的目标蛋白是35kd的那个吗?是否需要做酶切还是纯化融合蛋白就可以了呢?
GST蛋白亲和层析的确容
2014年06月21日发布人:红茶可乐
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产生λε 人浆细胞瘤
TM-HZ 产生λK 人浆细胞瘤
骨髓瘤细胞的培养 骨髓瘤细胞可用10%小牛血清的RPMI1640培养基以悬浮或半贴壁形式生长繁殖,对于半贴壁细胞无需用胰蛋白酶消化,直接用吸管吹打即可使细胞
2012年03月15日发布人:wsll
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=Black]
要看你要筛选多少条件,蛋白最好是越多越好,多多益善[/color][/size],[size=2][color=Black]
用融合蛋白做结晶可以吗?
我的融合蛋白是可容的
一用酶切开,目的蛋白就沉淀[/color
2014年02月10日发布人:luoliqiong
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[color=Black][size=2]大家好。最近我做GST融合蛋白,做了几次表达不出来。
我的目的蛋白36K。连接的重组体已经测序,测序结果没有问题,也已经融合上。 可是,30度,用IPTG1mM诱导4小时,从SDS-PAGE结果
2014年01月09日发布人:jrwyyplt
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配制1mg/ml的胶原酶溶液是用pbs来配,还是用三蒸水配制,是否可用培养液来配啊[/size],[size=2]应该用PBS或Hanks来配,胶原酶发挥作用需要离子强度和合适PH值,光用三蒸水配不利于酶的活性,培养液
2015年08月11日发布人:子衿青青
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[color=Black][size=2][font=Impact]我要纯化的融合蛋白加GST一共100多KD。做了一个多月了还是纯化不出来。给我质粒的那位学者说这种蛋白很容易被水解,诱导表达后跑SDS-PAGE看不出增强带,建议我直接
2014年05月15日发布人:rxcc33