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PMSF ,配细胞裂解液用,一般都是先用现加到裂解液里面。我买的是2mg粉状的PMSF,要把它配成溶液的贮存在4度的话,用什么溶解呀?(在水溶液中失活)[/font
2014年06月27日发布人:红袖添香
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用的是QIAGEN的 镍柱。但是最后发现在washing buffer, eluting buffer里面都没有一点蛋白。蛋白还都在裂解液里面。
我在混合binding buffer和蛋白裂解液的时候,是在4°下摇晃一小时。(本想减少其他
2013年09月02日发布人:911
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8.0
用的是QIAGEN的 镍柱。但是最后发现在washing buffer, eluting buffer里面都没有一点蛋白。蛋白还都在裂解液里面。
我在混合binding buffer和蛋白裂解液的时候,是在4°下摇晃一小时。(本想
2013年12月13日发布人:fsdd817
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blotting 的方法步骤
第一天:
脑组织蛋白的抽取:
⑴ 取小鼠海马、文状体、前皮质组织 ~200mg加1ml全细胞裂解液(组织裂解液(全细胞蛋白提取):1:Tris-HCL50mmoL/L(PH7.4) 2: Nacl
2014年06月28日发布人:49888
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:注射药物后10min,30min,1h,2h,3h,4h。能否待我把各时间点的细胞都收集好了,再统一加细胞裂解液,然后测蛋白???(1)但是我所在实验室 的有些同学说:不可以,必须是收集完细胞后马上加裂解液,然后测蛋白,但是如果这样做的话
2012年05月31日发布人:+小生怕怕+
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们多多帮助,不吝赐教!
我是提取细胞裂解液上样,最初的时候因为要检测的蛋白表达量低所以上样60ug,用的的PIERCE的荧光显色,开始1:2000稀释二抗,显色结果很好,荧光也非常亮,非常持久,stripping 3次以后还是能得到持久的
2013年10月06日发布人:qqshepherd
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:按说明书操作为培养的细胞用预冷PBS洗涤三次,加入100 μl细胞裂解液 PLB(Passive Lysis Buffer, Promega公司),室温振摇15min。但hepG2细胞贴壁很牢,在实际操作中发现裂解不是很充分,查了相关的
2012年03月26日发布人:阿k
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,和大家讨论更好的解决办法。
我现在在做的蛋白是磷酸化和总的p70s6k,分子量大小是70KD,是脑组织来源的蛋白。
实验方法简单叙述如下:
组织加裂解液匀浆,裂解液中含PMSF,loading buffer煮沸5分钟,-20冰箱保存
2014年01月15日发布人:is2011
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好象可以检测到钠克级
建议用发光法显色,较DAB显色提高1000倍灵敏度[/color][/size],[size=2][color=Black]
最主要是你在提蛋白的时候裂解液可少加点,这样可以提
2014年05月29日发布人:大尾巴
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各位前辈,请教大家关于TCA丙酮沉淀蛋白的方法。
1 直接100%TCA沉淀,使终浓度到达10%。离心,用预冷丙酮悬浮清洗。裂解液裂解。
2 10%TCA丙酮溶液沉淀。离心,用
2013年05月08日发布人:plaa