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CRISPR-Cas9敲除细胞系
9载体和腺病毒Cas9载体)。2.3 内源活性筛选:转染细胞或感染细胞48h后,使用Puro或Blasticidin筛选48h,提取基因组DNA。使用T7E1酶验证打靶载体的活性,将有效的突变型PCR
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CRISPR/Cas9敲除细胞系
载体(基因敲入):根据筛选的gRNA靶点位置,构建Donor普通载体或腺病毒载体,共转染/感染Cas9-gRNA和Donor。2.5 单克隆筛选:无限稀释到每孔1个细胞的数量,每株细胞铺至少2个96孔
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原位末端凋亡法(Tunel)实验
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CRISPR/CAS9慢病毒系统
接近100%,是理想的表达载体系统。 CRISPR- Cas9体系是由sgRNA和 Cas9核酸酶构成的DNA靶向识别剪切复合体。sgRNA识别一段20bp、3端紧接着539
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