-
[size=2][color=Black][font=黑体]
各位WB大虾,我的蛋白目的条带在100kd,在10%SDS-PAGE上条带清晰,初次做WB,两次都失败了.我用的条件是:80v,100mA,4h.膜上可看到预染Marker,但剩下的胶经考染,条带都没有了,膜上经一抗(单克隆抗体),二抗
2014年05月06日发布人:爱老虎游tt
-
[size=2][color=Black][font=黑体]
我前阶段做western内参actin结果好的,条带也清晰,但最近我用相同的条件再做就显不出条带,或是背景很深,不知道原因处在哪。
我是电泳60v/80v,转膜300ma
2013年06月01日发布人:暗香涌
-
[size=2][color=Black]
我做的western的目的蛋白是一个分子量为19KD的磷酸化蛋白,但重复了好多次,做出来的结果都只有在50KD左右一条带,在19KD附近看不到一点条带的影子.我不知道磷酸化蛋白的western
2014年06月09日发布人:ii077345
-
[size=2][color=Black][font=黑体]请问谁能告诉我是怎么回事啊,我的背景总是很深,尤其是目的蛋白那张膜,我的一抗是Santa Cruz的用1:100,洗半小时以上,二抗碧云天的1:3000,洗半小时,牛奶封闭半小时(封闭太久我担心没有目的条带了,所以只用了半小时),谁能够帮忙
2013年08月30日发布人:newway
-
[size=2][color=Black][font=黑体]各位老师学长:
请问western blot 对分泌性蛋白敏感吗??是不是不容易做,做的时候和普通蛋白有什么区别啊?谢谢指教!![/font][/color][/size
2014年02月19日发布人:fox_79
-
[size=2][color=Black][font=Verdana]
使用SIGMA的beta-actin鼠抗体做细胞系的内部参照,一般情况下会在42KDa出现单一的目的带,二抗我们用1:3000的比例。但是有时会发现有2条靠近且比42KDa稍小的带,搞不清楚是怎么回事。
一抗用的时间久了会出
2014年05月23日发布人:惊醒ing
-
[size=2][color=Black]
做Western Blot从准备试剂到开始做已经将近一个月了,开始是MARKER和GAPDH死活出不来,更不用说目的蛋白了,连影子也没看见过。
从新购买了试剂:内参Anti-beta
2014年01月14日发布人:ilovegaga
-
[size=2][color=Black]
western blot 中跑胶考染后发现条带弥散?
是加样量太大了或每个孔道都加样了靠的太近了?
可后来我大大减少了加样量跑出的条带还是弥散的厉害,跟边上的孔道条带连在一块了
是不是胶
2014年05月31日发布人:iii_ii
-
[size=2][color=Black][font=Impact]我用western blot做的P糖蛋白的表达,P糖蛋白是一种膜蛋白,分子量在170KD,属大分子量蛋白,而我的参照基因选择的是β-actin,分子量是43KD。
我
2013年06月05日发布人:cj_mondy
-
[size=2][color=Black][font=Verdana]
最近在做,2-D后的westen blot
做了几次老是做不好。转膜条件0.8mA/cm2,时间1个小时,50分钟也做过,都不行。转膜时间太长小分子蛋白转不上去
2013年11月30日发布人:yayya