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马上要在pGEX-4T-1中表达一个4.3KD的蛋白,不知道这个载体它的表达体系是不是和PET系列的类似,具体表达所用的温度啊,AMP的浓度,IPTG的浓度,诱导时间等等相关问题应该怎么把握
2014年02月09日发布人:docsy
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我做了三周的甲基化特异性PCR了,可用修饰完的DNA做模板,甲基化、非甲基化引物都扩不出来,而野生型引物确能扩出来,引物设计应该没问题,我现在高度怀疑是亚硫酸盐修饰有问题
2016年04月07日发布人:小荷尖尖
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[size=4][color=Black][font=黑体][求助]甲基化PCR
我用亚硫酸氢盐修饰后PCR扩增的方法做甲基化。PCR有大小合适的带但还有一些杂带,测序结果也是很多杂峰,不知道如何提高特异性。是酶的原因吗?大侠
2013年03月27日发布人:我是一片云
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,饱和湿度条件下培养。步骤如下:
1)试验时以2.5×104/mL的密度接种细胞于24孔板中(接种于24孔培养板,每孔细胞浓度为1×104个mL-1,每孔体积为600 μl,),待细胞长至60%开始分化;
2)用分化液1含0.25 m mol/L 异丁基甲基黄嘌呤(IBMX),5 ug/ml 胰岛素,
1u mol/l 地噻米
2015年11月14日发布人:fklo83
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我做了三周的甲基化特异性PCR了,可用修饰完的DNA做模板,甲基化、非甲基化引物都扩不出来,而野生型引物确能扩出来,引物设计应该没问题,我现在高度怀疑是亚硫酸盐修饰有问题,不知用国产的亚硫酸氢钠和对苯二酚(北京化学试剂
2016年03月03日发布人:newway
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化合物N-丁基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶胺的合成方法请求
就是四甲基哌啶酮与丁胺反应,主要是羰基的还原胺化,我用了乙酸,浓硫酸作为催化剂都没有成功,其中用硼氢化钠作为还原剂,请问哪位做过这个反应的给点指点,
1,这个催化剂用
2014年05月28日发布人:风往尘香
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合成氯化1-丁基-3-甲基咪唑盐离子液体
往三口烧瓶中加入80mLN-甲基咪唑(99%)和130mL氯代正丁烷。用80°C的油浴磁力搅拌,冷凝回流。有用氮气保护。实验到现在进行了48个小时,烧瓶底部颜色变为橙黄(有点像泡茶叶的茶水颜色
2014年03月19日发布人:adg
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我用pGEX4T1融合GST表达我的蛋白,再用beads纯化。结果显示在纯化前,有我的目标蛋白,但是纯化后,仅在26KD附近有一条带,和GST大小差不多。请问高手们这是怎么回事啊? 结果见图
2013年07月31日发布人:nikonun
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我用pGEX4T1融合GST表达我的蛋白,再用beads纯化。结果显示在纯化前,有我的目标蛋白,但是纯化后,仅在26KD附近有一条带,和GST大小差不多。请问高手们这是
2013年11月18日发布人:lorri
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养了有半年的3T3-L1,最近做诱导分化实验,可总是失败,到分化后第4天,细胞不少死亡,而且周围有大量黑点,还有脱壁情况发生.
这使我对细胞本身产生了怀疑,因为这细胞是别人送给我的
2012年02月18日发布人:loli