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请教WB的各位同仁,前辈,
刚开始学做western, 内参蛋白用的是beta-actin,可是检测出来的条带一直都是在50-75kda之间,beta-actin的
2013年10月31日发布人:tie8
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beta-actin是细胞骨架蛋白,主要存在胞质,问题是胞核内也存在吗?是否可作为核内NF-kB的内参呢??[/color][/size],[size=2][color=Black
2014年02月03日发布人:ladyhuahua
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我用pGEX4T1融合GST表达我的蛋白,再用beads纯化。结果显示在纯化前,有我的目标蛋白,但是纯化后,仅在26KD附近有一条带,和GST大小差不多。请问高手们这是
2013年11月18日发布人:lorri
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融合蛋白表达的不是很好,经sarkosyl处理以后是可溶的,用上清作纯化,做了两次什么都没洗脱出来.填料应该是没问题的,因为用来做空载体GST的纯化,洗脱出大量的GST.最近又用融合蛋白
2014年07月04日发布人:qiangren789
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用Ni sepharose 6 fast flow纯化His-tag 蛋白,刚开始做,先做了咪唑浓度梯度的优化,用了20,60,100,200,300mM的咪唑浓度
2013年11月12日发布人:pou
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[size=2][color=Black][font=黑体]请问beta-actin有条带,却没有目的条带是哪些方面所致?
我的实验步骤如下:
1.提取组织总蛋白的裂解液如下:
单去污剂裂解液(50mmol/L Tris•HCl
2014年02月22日发布人:mogu
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[size=2][color=Black]我很想请教一下GST fusion protein 实验过程以及其应用!
请多多指教!![/color][/size],[quote]原帖由 [i]yayya[/i] 于 2013-11-15
2013年11月15日发布人:yayya
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我现在在纯化GST重组蛋白(表达是费了一个月的时间,好不容易搞定了,汗),遇到一个问题,请大家指教!
我的重组蛋白是不可溶的,加上GST为66KD,我是先把它挂上 sepharose 4B
2014年05月24日发布人:utt0989
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RT。
图中上清里有融合蛋白表达,但在纯化时跟GST磁珠不结合,请高手指教。
蛋白分子量未100kd左右
自左向右为:Marker,未诱导,诱导,未诱导,诱导[/color][/size
2014年03月13日发布人:kewanqi2011
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Glutathione Sepharose 4B,但不知道pull down是什么
就是用Glutathione Sepharose 4B亲和结合GST蛋白标记啊[/font][/color][/size],[size=2][color=Black
2013年10月08日发布人:standbyme