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细菌包涵体变性裂解方法。主要的目的是纯化蛋白制备单抗。采用的NI是NOVAGEN(NI-NTA HIs bind Resins)产品。步骤完全照说明书进行。 [/color][/size],[size=2][color=Black]这样的
2013年05月13日发布人:如影随形
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小弟用pET表达了带有his-tag的融合蛋白,然后用novagen公司的His-Bind kit纯化蛋白,200ul镍柱,35ml细菌培养物,采用离心法。SDS-PAGE(上样量15ul)图
2014年07月04日发布人:wu11998866
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蛋白质是生命活动最终的控制者和执行者。在分子生物学研究中,往往会陷入一种尴尬局面:DNA编码了RNA,RNA也翻译成了蛋白,但却无法解释蛋白何时、如何、以及为什么被激活,从而
2013年05月22日发布人:NBA
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我已经成功在在我的目标蛋白的基因后连接了his尾巴,可是今天做亲和层析实验,发现我的蛋白全部从流过峰里面流出来了,洗脱峰中检测不到我要的蛋白?
我的蛋白是个六具体,我在c端加的尾巴, 我猜想
2014年06月10日发布人:bananapeople
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还是不能结合上去,透析的目的蛋白也不见了
我自己分析一下原因,可能有几个1,his tag树脂不行,我用重生柱的,按照说明书进行(不知道大家用的是什么样的流程重生,我的是先用离子化缓冲液过柱,bindbuffer平衡后就加液体,采取了连续流过的方法,一次性过几十毫升);2,上清中盐离子浓度太高,初步算了一下,达到0.4mol的
2014年06月17日发布人:079777chao
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[size=2][color=Black][font=黑体]最近相继自己审核或帮老板审核几篇蛋白质组学论文, 如果是基于SELDI或2DE技术的profiling, 审稿意见基本是拒绝发表, 无论IF多么低的杂志。当然不是所有审稿人的观点
2013年10月17日发布人:txwuyan
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最近在养293细胞,烦死了,明明长得很好,换一次液(同一批培养液)后就出现大片脱落,几乎没了,还等着冻存呢!
好几次这样了。
这是什么原因?请高手指教![/b][/color
2012年06月19日发布人:8964357
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blot检测不到!难道要换载体?,因为我后面要过镍柱纯化此蛋白!所以就算蛋白鉴定是对的,它不带His tag的话,该蛋白我也得不到啊!
是原使用的载体有问题吗??求助!求助!,[size=2][color=Black]测序验证下翻译后是否还带有his标签
2013年04月27日发布人:pengke1983
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[size=2][color=Black][font=黑体]我表达的蛋白大小在31 kDa左右。在N端有6个His.我在NATIVE 的条件下,用的binding buffer 50mM NaH2PO4, 500 mM NaCl
2013年09月02日发布人:911
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[size=2][color=Black][font=Impact]我表达的蛋白大小在31 kDa左右。在N端有6个His.我在NATIVE 的条件下,用的binding buffer 50mM NaH2PO4, 500 mM NaCl
2013年12月13日发布人:fsdd817