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胰酪胨 15.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g氧化钠 3.0g 琼脂 15.0g水 1000 ml除琼脂外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后在25℃为7.3±0.2,加入琼脂,加热溶化后,摇匀,分装,灭菌。
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琼脂糖凝胶电泳原理 琼脂糖凝胶电泳,是以琼脂糖为介质,对不同大小的DNA 或 RNA 实现分离的一种电泳方法。琼脂糖是一种多糖,具有亲水性,但是不带电荷。 使得 DNA 在碱性条件下使其带负电荷(pH8.0 的缓冲液),在电流作用
2021-01-17
来源: Worldshaper
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琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。DNA分子在高于其等电点的
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聚丙烯酰胺凝胶电泳,普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从
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。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解,温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶,这是它具有多种用途的主要特征和基础。琼脂糖凝胶性能通常用凝胶强度表示。强度越高,凝胶性能越好。
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称量、溶胶、倒胶、拔梳。配置步骤如下:1、称量,小胶板0.8%的胶需要琼脂粉0.104gTBE13mL。2、熔胶,将所称量的琼脂粉与TBE在锥形瓶中混合,在微波炉内反复加热2到3次至琼脂粉溶解并无气泡。3、倒胶,干净的胶槽内摆好梳子,往胶内滴加1uL左右核酸染料,混匀,待冷却至不烫手,轻轻倒入胶板内。4、拔梳待大约2分钟即可。
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在进行微生物培养时,若正置培养,琼脂培养基中的水分易蒸发使平板干裂,不利于微生物的生长;同时水蒸汽会在平皿盖上形成冷凝水,若回落在培养基表面,会使菌落蔓延生长,无法计数,若冷凝水太多会使培养基与平皿分离,容易滑动倒置培养可减少培养基表面
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可能有几种原因导致琼脂糖凝胶电泳时loading buffer中两条带分不开:1. 样品中含有类似大小、相似电荷密度的多个DNA分子,使得它们在凝胶上迁移的速度和距离非常相似,难以区分。2. 凝胶电泳分离过程中进行的步骤未正确执行,如电泳
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1、 DNA的分子大小及构型: 不同构型DNA的移动速度次序为:共价闭环DNA(covalently
closed
circular,cccDNA)>直线DNA>开环的双链环状DNA。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的
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琼脂糖凝胶电泳的原理:琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场