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各位战友,我最近纯化一蛋白,先是用镍柱亲和纯化,然后用凝血酶切除his标签。切除是在室温过夜进行的,将酶切混合物加到透析袋,以去除切掉的his tag以及elution过程中的大量咪唑。透析液
2014年02月03日发布人:969
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我的重组蛋白带His标签,挂柱子前的cell-free体系是有活性。
柱子用含20mM 咪唑的binding buffer平衡好,样品挂柱子后不经任何处理,直接收集的馏分就已经没有活性了。
更不要说含80mM,250mM咪唑的
2015年10月27日发布人:无怨无悔
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用Ni sepharose 6 fast flow纯化His-tag 蛋白,刚开始做,先做了咪唑浓度梯度的优化,用了20,60,100,200,300mM的咪唑浓度
2013年11月12日发布人:pou
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载体是pGEX
蛋白结构是GST-target protein-6His
纯化是用Ni-IDA纯化包涵体蛋白
电泳是SDS-PAGE变性电泳
不同的目的蛋白,表达均有图上那条比主
2013年11月09日发布人:purrr
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惨了,我合成了11对引物,大概有400bp,10OD,要1000多,其实不要10OD的,2OD就够了,但是看丁香园有人说价格都是一样,不管是2还是10OD,
现在我这生工代理要2.8元/BP,我该怎么半啊
我以为是
2015年12月04日发布人:969
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和novagen的柱子怎么样?安玛西亚的预装柱卖多少钱呀?,[size=2][color=Black]
qiagen的纯化柱子很多都是针对6His纯化的,Ni-NTA申请了专利的,novagen的柱子来自qiagen的授权;而且今年
2013年11月16日发布人:如影随形
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[size=2][font=黑体]最近要开始试验了,从没养过细胞,这次要用HEK293,没有找到相关的文献,有没有前辈能够指导一二,或者给我点相关的文献啊?非常感谢了。[/font][/size],[size=2]
我们这养过 还算好养
2015年02月23日发布人:october7
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[size=2][color=Black][font=Verdana]本人表达带六个his的一个蛋白的片断,计算理论分子量是20kDa左右。用NI柱纯化并优化纯化条件,发现主要有约20kDa、约40kDa、约80kDa三条带。后来
2014年06月05日发布人:damingxia0904
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本人从事动脉粥样硬化的相关研究,前期作原代的脐静脉内皮细胞,能养活,但是细胞数量不足以满足试验需要,因此准备找细胞株。
但是ECV-304已经不承认了,请问EA.HY
2012年05月09日发布人:xyw5
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小弟想问一下怎样对鹅鸡IL-2的活性单位进行的测定.因为要上动物实验,注射时应该用活性单位来计算,但自己表达的蛋白的活性怎样计算他的活性单位了?[/color][/size],[size=2
2014年04月13日发布人:鹅鹅鹅