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我的重组蛋白带His标签,挂柱子前的cell-free体系是有活性。
柱子用含20mM 咪唑的binding buffer平衡好,样品挂柱子后不经任何处理,直接收集的馏分就已经没有活性了。
更不要说含80mM,250mM咪唑的
2015年10月27日发布人:无怨无悔
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本人从事动脉粥样硬化的相关研究,前期作原代的脐静脉内皮细胞,能养活,但是细胞数量不足以满足试验需要,因此准备找细胞株。
但是ECV-304已经不承认了,请问EA.HY
2012年05月09日发布人:xyw5
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小弟想问一下怎样对鹅鸡IL-2的活性单位进行的测定.因为要上动物实验,注射时应该用活性单位来计算,但自己表达的蛋白的活性怎样计算他的活性单位了?[/color][/size],[size=2
2014年04月13日发布人:鹅鹅鹅
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[size=2][color=Black][b]载体是pGEX
蛋白结构是GST-target protein-6His
纯化是用Ni-IDA纯化包涵体蛋白
电泳是SDS-PAGE变性电泳
不同的目的蛋白,表达均有图上
2023年07月15日发布人:ilovegaga
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目前手上有一个别人构建的重组蛋白,含六个HIS标签,用QIAGEN公司的Ni-NTA supper flow纯化。
以前用《A handbook for high-level
2014年01月16日发布人:bgf5
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小弟用pET表达了带有his-tag的融合蛋白,然后用novagen公司的His-Bind kit纯化蛋白,200ul镍柱,35ml细菌培养物,采用离心法。SDS-PAGE(上样量15ul)图
2014年07月04日发布人:wu11998866
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信息,你说的是不是国产的柱子?老板要求买进口的。qiagen和novagen的柱子怎么样?安玛西亚的预装柱卖多少钱呀?[/color][/size],[size=2][color=Black]
qiagen的纯化柱子很多都是针对6His
2013年07月29日发布人:remenb
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我已经成功在在我的目标蛋白的基因后连接了his尾巴,可是今天做亲和层析实验,发现我的蛋白全部从流过峰里面流出来了,洗脱峰中检测不到我要的蛋白?
我的蛋白是个六具体,我在c端加的尾巴, 我猜想
2014年06月10日发布人:bananapeople
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蛋白的立体结构使His标签没有完全暴露在外,与Ni结合不紧密。[/size],[size=2]嗯,您说的这种情况很可能发生。那是不是也有可能和填料有关呢?[/size],[quote]原帖由 [i]+小生怕怕+[/i] 于
2015年01月17日发布人:+小生怕怕+
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我用 western-blot 检测脑组织中的IL-1B,TNF-a,两种抗体都是chemicon公司的,都是rabbit anti-rat,上样量已加至100ug
2014年06月14日发布人:youreyes