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,his标签的包涵体好纯化。要不降低温度摸索个可溶性表达的条件[/size][/color],[size=2][color=Black]
本人对GST柱子不熟,尿素对它有没有影响不是很清楚
但尿素体系同样可以上离子交换,如果了解蛋白性质也可以
2014年03月31日发布人:bhka
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我用pGEX4T1融合GST表达我的蛋白,再用beads纯化。结果显示在纯化前,有我的目标蛋白,但是纯化后,仅在26KD附近有一条带,和GST大小差不多。请问高手们这是
2013年11月18日发布人:lorri
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融合蛋白表达的不是很好,经sarkosyl处理以后是可溶的,用上清作纯化,做了两次什么都没洗脱出来.填料应该是没问题的,因为用来做空载体GST的纯化,洗脱出大量的GST.最近又用融合蛋白
2014年07月04日发布人:qiangren789
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用Ni sepharose 6 fast flow纯化His-tag 蛋白,刚开始做,先做了咪唑浓度梯度的优化,用了20,60,100,200,300mM的咪唑浓度
2013年07月22日发布人:shanzhapia696
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[size=2][color=Black]求教各位大侠:我表达的蛋白带有GST标签,但是是以包涵体形式存在,因为要用有活性的蛋白做后续实验,所以我选择用8M尿素溶解包涵体,然后又梯度复性,但是复性后的蛋白怎么也挂不上GSTFF柱,因为
2013年10月11日发布人:静夜思
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各位童鞋你们好,请教你们一个问题:我在用His-tag磁珠试剂盒纯化带有His标签的蛋白,为什么蛋白老是结合不到磁珠上去?以至于纯化效率极低。有人说是pH问题,变性洗净液的pH为8.0,用之
2013年06月05日发布人:wsll
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我现在在纯化GST重组蛋白(表达是费了一个月的时间,好不容易搞定了,汗),遇到一个问题,请大家指教!
我的重组蛋白是不可溶的,加上GST为66KD,我是先把它挂上 sepharose 4B
2014年05月24日发布人:utt0989
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我现在用Ni柱纯化his蛋白,想做柱上复性,遇到的问题如下。
收集各步洗涤的溶液,检测结果发现在蛋白加到柱子上以后就很多蛋白没有结合就流了下来,第一次洗涤溶液中蛋白量也不少,之后的几次
2013年06月08日发布人:hulu呼噜
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,表达时间3小时、7小时,跑胶做western blotting,结果发现我的载体只表达出GST标签蛋白[/font][/color][/size],[size=2][color=Black][font=Impact]
我的western
2013年12月20日发布人:rxcc33
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大家好!我最近在纯化一种带GST标签的蛋白,诱导条件摸索的过程中发现它的包涵体的量很大,上清中有少量的蛋白。所以我就将包涵体用6M的尿素溶解后,复性,透析,过GST柱,结果发现:
1 我
2013年08月20日发布人:dreaming