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℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。(二) 细胞复苏1. 从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水
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的测试管,按上述方法测其旋光度值,重复两次,取其平均值,由葡萄糖溶液的比旋光度计算浓度。实验完毕,洗净测定管,再用蒸馏水洗净,擦干存放。注意镜片应用软绒布揩擦,勿用手触摸。注意事项:1、旋光管中不能有气泡。2、旋光管管盖只要旋至不漏水即可
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℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。(二) 细胞复苏1. 从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水
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仅仅一夜的话,不用担心。只要你冻存没有其它问题,细胞肯定能活,只是复苏后死细胞可能多一些。
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细胞代谢活动近乎停止。细胞因此进入休眠状态,使细胞“不会老”,所以可以长期保存。因为冻融过程对所有细胞和组织都是有一定伤害的,因此,需要开发出有效的技术来防止细胞死亡和损伤。 ▲ 细胞冻存过程 低温保护剂可保护细胞不受细胞内冰冻影响,目前多
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存上几年没有问题,反复复苏对细胞活性会有影响细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞
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细胞培养过程会出现污染或者有些细胞诱导分化只能在前20代进行,细胞冻存能够保证在细胞污染或出现其他情况时有种子细胞,当然如果你们课题组有钱也可以不用冻存,出现问题就重新买. 冻存没有必须要传几代的限制,可以连续冻存,只要细胞状态好就可以. 具体冻存过程可以去丁香园或者小木虫上找.
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冻存的原则是:慢冻,主要是防止细胞在冷冻过程中形成冰晶,对细胞造成损害,加DMSO也是这个原理.复苏细胞的原则是:快融.主要是防止DMSO在液体状态下对细胞的毒害作用,快速使细胞进入复苏和生长状态.因此,细胞的冻存与复苏原则应该是慢冻快融.分别经过4度,-20度,-80度和液氮的依次过程进行冻存;经过37度水浴1分钟之内解冻细胞冻存液进行复苏.
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密度为4~20×106/ml)。5. 吸取适量LiveCyte® DMSO-free,重悬细胞,立即0.5ml/管分装至细胞冻存管(可冻存体积为0.2~1ml/管,最佳体积为0.5ml/管)。6. 立即将冻存管移入-80℃低温冰箱,不能采取
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,一定注意带好防冻手套,护目镜。此项尤为重要,如果冻存管密封不严,细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时,在水浴中摇晃,冻存管中的气温急剧上升,可导致爆炸,所以,一定要戴保护眼镜和手套,复苏过程中应盖上恒温水浴锅的盖。应在1-2min内使冻存液完全融化