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如下图,我用的是novagen的His bind resin,没有过柱,按照操作手册上的方法在EP管里进行小批量的纯化,在4度翻转结合了1h,这里的上样量大约相当于500ul的菌液。从这个图的
2014年01月18日发布人:chengjie79
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大家好,我原来用pET28a载体在BL21(DE3)中表达,蛋白表达量很高,可是包涵体的形式,经过几次复性不成功后,决定更换载体和菌株来进行可溶性表达。结果原来表达
2014年01月15日发布人:mnstyle
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我在做蛋白诱导,载体是pET32a,目前诱导温度是37度,IPTG最大浓度到5mmol/L,但是诱导结果不太理想,主要是量比较小,请问大家,IPTG可不可以加大浓度呢?它的作用原理是什么呢
2023年09月23日发布人:@STAR@
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老板让我做蛋白质结晶和X射线衍射,实验室没人做过,一头雾水!请大家推荐些这方面的文献,或是一些在这方面比较强的牛人!
拜托!感恩不尽![/color][/size],[size=2
2013年11月21日发布人:bluelake
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pET-32a(+),就是在下游引物没有加上终止子,结果表达出来之后,用我买的国产的填料就纯化出来了。我自己的蛋白当初没有在末尾加上终止子,这也是参照我之前一个老师做的才这么做的。那个蛋白也是包涵体表达。我之前自己用填料纯化就是纯化不出来,现在看来是自己的N端的His标签没有显露
2013年10月27日发布人:remonte
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要用分泌型蛋白做Western blot,想加药物刺激后分别从细胞的和细胞上清液中提取蛋白。但不知道细胞上清液提取蛋白的具体方法,好像还需要浓缩。谁做过的,可不可以分享下经验。最好有具体的
2013年04月11日发布人:dhpbj
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惨了,我合成了11对引物,大概有400bp,10OD,要1000多,其实不要10OD的,2OD就够了,但是看丁香园有人说价格都是一样,不管是2还是10OD,
现在我这生工代理要2.8元/BP,我该怎么半啊
我以为是
2015年12月04日发布人:969
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,后续试验发现我的蛋白也堵亲和柱和凝胶柱,难道是蛋白粘性太大?
问题三:亲和收集到极少量样品(洗脱峰280nm吸收为穿透峰的1/9,500mAU左右),且SDSPAGE显示主带为60kD(三聚?),而20kD目标带很弱。His柱子用NiSO4再生后发现出峰时电导与280同步升高
2013年12月16日发布人:jiushikeshui371
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[size=2][font=黑体]最近要开始试验了,从没养过细胞,这次要用HEK293,没有找到相关的文献,有没有前辈能够指导一二,或者给我点相关的文献啊?非常感谢了。[/font][/size],[size=2]
我们这养过 还算好养
2015年02月23日发布人:october7
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[size=2][color=Black][font=Impact]我整整坐了一年的蛋白纯化及鉴定,虽然单调,但是整个非变性的HIS标签纯化系统及
SDS-PAGE方法 人鼠杂交瘤单抗的制备方法,俱已经摸所得差不多了,各位战友如
有
2013年06月04日发布人:逗号是句号