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[size=2]从来没有接触过RNA的新手,准备从外周血淋巴细胞中提取RNA,然后进行逆转录,进一步通过PCR获得目的基因。虽然看了不少资料,可还是心里没底,不知道哪个地方会遗漏,导致实验失败。现将自己看过资料后的心得,还有疑问提出来
2015年11月10日发布人:sunnyB
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各位师兄师姐:本人想提取大量细胞膜蛋白做受体纯化,已设计把RAW264.7细胞打入小鼠腹腔,收集腹水细胞及腹腔肿瘤,但收集到的细胞如何保存,文献上说要保存到裂解液中,然后提膜蛋白,不知该如何
2014年02月05日发布人:junhun
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我在用RIPA裂解液提取肠上皮细胞蛋白,操作流程如下:
1、弃去六孔板中的培养基
2、用PBS冲洗三遍,最后一遍吸干净(PBS 4℃预冷)
3、裂解液200ul/孔,冰上
2012年03月10日发布人:+小生怕怕+
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那种细胞培养平,一瓶的细胞(大概1,000,000细胞)提取出来的蛋白只有1~200ug的话,是否提取不完全呢?我将细胞放在裂解液,冰上裂解2个小时再离心的,这样有问题吗?[/color][/size],[size=2][color=Black]100V,30miN都够了....
你的目的蛋白才28KD...
转久了,就只剩大分子量的蛋白在膜上了,
2014年03月10日发布人:mickeylin
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我是第一次接触PCR实验,PCR的模板是经逆转录生成的cDNA,请问为什么不能直接提取DNA进行直接进行PCR反应呢?[/font][/size],[size=2]
因为你是做基因的mRNA表达水平
2015年12月31日发布人:H2O
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我提取的RNA用DEPC处理过的水溶解后保存在液氮中,请问大概能保存多久?我已保存十天,不知还能用来扩增吗?[/size],[size=2]
应该没问题的,我提的RNA在-20度保存了一个月都能扩出来.我师兄更吓人
2016年01月07日发布人:HP007
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[size=2]我在RT-PCR实验中提取RNA后,发现一些不该出现强表达的基因,最后PCR产物也有很多。我有些怀疑是否是RNA提取过程中混有DNA。请问RNA混有DNA会出现靶基因PCR产物增多的现象吗?您平时实验中RNA提取后是否常规
2016年02月05日发布人:applebook=213
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【求助】ICP-MS 810仪器使用中问题,是没有浓度还是很低,试试其他低质量数的元素,然后配制新的调谐液试一试,有可能是质量校正文件丢失,可能需要重新MASS CAL,质量校正通过没有?漏水只对电脑造成了损害么?对仪器的影响呢?,我也
2015年06月23日发布人:shuishui
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小弟现在做一个膜蛋白的vwestern,分子量为50多,之前用RIPA的裂解液,还可以看到目的条带,但是很淡,为了更好的效果,小弟又专门订了Pierce膜蛋白提取试剂盒,结果很奇怪的就是
2013年04月27日发布人:superboy
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请教各位高手下面的提取细胞蛋白的方法是否可行?多谢
1.用胰蛋白酶消化细胞,加含血清DMEM终止反应
2.离心弃上清加PBS打匀
3.再离心弃上清得到细胞
4.加细胞
2014年05月06日发布人:vcve