-
[size=2]
请问一下细胞不同部位蛋白的提取方法,最近看了一些文献,比如细胞的总蛋白,膜表面蛋白,胞浆蛋白,胞核蛋白,似乎都有不同的提取方法,不知道有没有高手可以告知具体的步骤和大致的原理,非常感谢了。[/size],[size=2
2015年08月10日发布人:shkudo
-
还是不能结合上去,透析的目的蛋白也不见了
我自己分析一下原因,可能有几个1,his tag树脂不行,我用重生柱的,按照说明书进行(不知道大家用的是什么样的流程重生,我的是先用离子化缓冲液过柱,bindbuffer平衡后就加液体,采取了连续流过的方法,一次性过几十毫升);2,上清中盐离子浓度太高,初步算了一下,达到0.4mol的
2014年06月17日发布人:079777chao
-
[size=2][color=Black]我们知道Cys存在与许多蛋白中,且其中的-SH常作为活性中心发挥作用,或者,两个-SH连接成二硫键,是维持蛋白质高级构象重要桥梁。
-SH具有很强的还原性,溶液被溶液中的溶解氧或其它氧化物氧化
2013年08月14日发布人:tudou85
-
[size=2][color=Black]
我已经成功在在我的目标蛋白的基因后连接了his尾巴,可是今天做亲和层析实验,发现我的蛋白全部从流过峰里面流出来了,洗脱峰中检测不到我要的蛋白?
我的蛋白是个六具体,我在c端加的尾巴, 我猜想
2014年06月10日发布人:bananapeople
-
[color=Black][size=2]
看了许多帖子,大家大多是谈的实验操作问题,很少涉及大生产的问题,不像其他板块。其实目前蛋白质大生产前景看好,许多蛋白质表现出很好的生理药理活性,如何使这些蛋白质转化为生产力,为社会,为大家,为
2014年04月19日发布人:yapuyapu
-
[size=2][color=Black][font=Impact]
在蛋白质组学研究中,如果使用高通量方法会得到大量蛋白质数据, 这就需要采用生物信息学的方法进行处理. 这里介绍一篇文章,希望能起到抛砖引玉的作用, 让大家讨论一下还可
2013年10月11日发布人:草木叉
-
[size=2][color=Black][b]
现在我的实验是用镍纯化柱来纯化带有His-tag的脂肪酶,并且需要保留它的活性进一步做酶学性质分析。我用的是GE的HisTrap HP的5mL柱来纯化,按照柱子的说明书在配制洗脱缓冲液
2014年01月15日发布人:菠萝喵
-
[size=2][color=Black]大家可以自己尝试,8M的尿素你扔到-18度的冰箱里面看看会有什么结果就行了。[/color][/size],[size=2][color=Black]低温,安静,平滑的变性盐下降,加上电场约束,复性还需要什么?希望大家提供宝贵意见,进一步改进这台仪器
2013年11月27日发布人:zsxan1990
-
]
有人说,要在loading buffer和转移buffer中加入磷酸酶抑制剂Na3VO4,可有人说没加也做出来了。我觉的应该这不是关键问题,所以没加。但遗憾的是,前不久做的western,最后b-actin显色挺好的,但我的磷酸化目的蛋白一点
2014年05月12日发布人:wanglaoshi
-
[size=2][color=Black][font=Verdana]
大家好,我原来用pET28a载体在BL21(DE3)中表达,蛋白表达量很高,可是包涵体的形式,经过几次复性不成功后,决定更换载体和菌株来进行可溶性表达。结果原来表达
2014年01月15日发布人:mnstyle