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目的蛋白!但用6*HIS tag标签抗体做western blot发现出现目的条带的确是14KD左右的蛋白!见图!这是为什么呢?将14KD蛋白切下做质谱鉴定并非所需目的蛋白!
望大侠们赐教![/b][/color][/size],[size
2013年04月27日发布人:pengke1983
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[size=2][color=Black]最近做表达,65KD的蛋白,使用pET268载体,准备柱纯化,不知道改选择哪个公司的柱子比较好?第一次接触,还望大家帮忙[/color][/size],[size=2][color=Black
2013年11月16日发布人:如影随形
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[size=2][color=Black][font=黑体]我表达的蛋白大小在31 kDa左右。在N端有6个His.我在NATIVE 的条件下,用的binding buffer 50mM NaH2PO4, 500 mM NaCl
2013年09月02日发布人:911
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[size=2][color=Black][font=Impact]我表达的蛋白大小在31 kDa左右。在N端有6个His.我在NATIVE 的条件下,用的binding buffer 50mM NaH2PO4, 500 mM NaCl
2013年12月13日发布人:fsdd817
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现做一固体制剂,准备整理CTD资料,有三个规格,且三个规格的各组分处方量不相同,这种情况,资料整理到一套中,还是三个规格分开整理啊?感觉两种情况整理起来都显得比较乱,审评中心针对这样情况,是怎么建议的呢?请有经验的同仁解答。,如果API和
2014年02月06日发布人:a456
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步骤一样,上myc和我要拉的基因的一抗,过夜,然后再用二抗,ECL发光,但myc自身总是显不出来,多谢了。[/color][/size],[size=2][color=Black]
先确定一下你的myc抗体能做IP么?protein G beads有没有问题?与你的蛋白的表达量有没有关系?Co-IP的蛋白能检测出来
2012年05月09日发布人:kuaizige
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其他经典的好方法呢? 我是新人![/color][/size],[size=2][color=Black]
重组到pET或 pGEX系列载体里,你就可以通过his 或GST标签纯化它了.[/color][/size],我现在在做一个蛋白
2014年01月09日发布人:hustwb
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载体表达的.[/color][/size],[size=2][color=Black]
lz是用E.coli表达的么?
表达的蛋白会不会对E.coli有伤害或者被E.coli降解呢?
也许可以试试不同的表达系统,比如yeast等等
2013年07月20日发布人:bananapeople
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E.coli表达的,带His tag的融合蛋白,纯化效果很好,一步亲和就可以达到电泳纯。但是4℃放置,就逐渐有沉淀析出。理论pI在7附近,MW为45kD,有7个cys。
最后的buffer为
2014年02月20日发布人:uuooii
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大家好,我用AKTA的机器纯化蛋白。表达菌株是全式金的Rosset(ED3),表达载体是pet30。
目的蛋白以包涵体形式表达、得到包涵体以后,经过2M的尿素和
2013年12月14日发布人:shanzhapia696