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目前手上有一个别人构建的重组蛋白,含六个HIS标签,用QIAGEN公司的Ni-NTA supper flow纯化。
以前用《A handbook for high-level
2014年01月16日发布人:bgf5
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小弟用pET表达了带有his-tag的融合蛋白,然后用novagen公司的His-Bind kit纯化蛋白,200ul镍柱,35ml细菌培养物,采用离心法。SDS-PAGE(上样量15ul)图
2014年07月04日发布人:wu11998866
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我已经成功在在我的目标蛋白的基因后连接了his尾巴,可是今天做亲和层析实验,发现我的蛋白全部从流过峰里面流出来了,洗脱峰中检测不到我要的蛋白?
我的蛋白是个六具体,我在c端加的尾巴, 我猜想
2014年06月10日发布人:bananapeople
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蛋白的立体结构使His标签没有完全暴露在外,与Ni结合不紧密。[/size],[size=2]嗯,您说的这种情况很可能发生。那是不是也有可能和填料有关呢?[/size],[quote]原帖由 [i]+小生怕怕+[/i] 于
2015年01月17日发布人:+小生怕怕+
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各位学者老师,大家好,
小弟又来请教问题了^_^
浙大智达的N2000,用内标法进行试验的时候,被测物里面的内标液含量 必须和 标样里的内标物含量 相同。应该是这样吧。
除了被测物里面的内标液含量不同以外,其他试验条件
2010年08月16日发布人:mimeitakashi
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我是用AA320N做个标准曲线,升温程序如下:干燥温度 120 30s
2011年01月03日发布人:羊脂球
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还是不能结合上去,透析的目的蛋白也不见了
我自己分析一下原因,可能有几个1,his tag树脂不行,我用重生柱的,按照说明书进行(不知道大家用的是什么样的流程重生,我的是先用离子化缓冲液过柱,bindbuffer平衡后就加液体,采取了连续流过的方法,一次性过几十毫升);2,上清中盐离子浓度太高,初步算了一下,达到0.4mol的
2014年06月17日发布人:079777chao
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新手,我的是tcd检测器,分析co,co2,no,h2,n2等气体,选用什么柱子?什么方法可行?,根据提供的待测物,根据你现有的条件可以有以下选择:
1,载气用氩气,用两根色谱柱来做,一根用高分子聚合物得,比如:porapak q,此柱
2011年05月06日发布人:qixiangsepu
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请各位告知1N HCl的配制方法,谢谢[/b][/color][/size],市售的盐酸是11.97N,[size=2][color=Black]
市售的盐酸是不是那种36%—38%的
2012年10月08日发布人:tieshazhang
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载体是pGEX
蛋白结构是GST-target protein-6His
纯化是用Ni-IDA纯化包涵体蛋白
电泳是SDS-PAGE变性电泳
不同的目的蛋白,表达均有图上那条比主
2013年11月09日发布人:purrr