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各位战友,大家好,我是一个原核表达纯化的新手,手里有两个待纯化的蛋白,准备纯化脱盐后给细胞用。
蛋白是在N端有6his标签,用的是Ni柱纯化(AKTA一款比较老的纯化仪)。
大致步骤如下
2013年10月31日发布人:#甜#
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多的话面积也会变。[/size],[size=2]楼上站友你的观点我不赞同,柱温箱还是必要的(有些分析)。[/size],[size=2]楼上说的基本对,不过我做盐酸林可霉素用的是缓冲溶液,可是柱温高,保留时间反而有点后移的现象
2015年11月24日发布人:ns5fan
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各位大哥大姐:
1、我们那个TDI试剂里面已经聚合了,就是里面有那个小颗粒还可以用来测相对校正因子吗。
2、用过的TDI试剂怎么无害化处理呢?
3、要是用这个测的话是不是应该先来打一针看一下纯度呢,再来做相对校正因子。
小弟谢谢
2011年06月15日发布人:小江
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分析结束后,冲柱子时间一般都有半小时或以上了。为什么第二天开始平衡的时候,开始柱子上都会出个很高的峰呢?是没冲洗干净吗?,不是没洗干净。
个人理解是这样的:由于改变流动相条件,柱子里洗脱剂组成改变,导致通过过UV检测池时紫外透光率
2010年03月06日发布人:宝宝2007
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我是准备用生理盐水对硝酸甘油溶液稀释后用hplc进行分析,流动相甲醇:水,215nm波长,应该如何清洗柱子呢?还有NaCl会不会在此处有峰,谢谢。
如果是换成pbs缓冲液稀释呢,又如何洗柱子?
[[i] 本帖最后由 空白照片 于
2010年12月27日发布人:空白照片
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大家在分析时是不是经常切割色谱柱呢?比如发现柱头有杂质或者不平整,还有就是装上石墨垫后柱头有点污染需要切割的,柱子用久了为得到好的峰型需要切去一段的,经常这样切割,长度也不准了,都会带来什么影响呢?而且像那种一点点的,我从来记不起来量切去
2010年11月22日发布人:jioe5
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有机酸。
请问54号色谱柱是什么柱子?,强酸性还是强极性呀?强酸性的样品做多了可能会改变固定相的极性哦。
如果是强极性的样品也可以在弱极性柱上分析。分析结果的准确性要标化的吧,楼主,不稀释吗?稀释后问题不大,最好说下是什么酸?目标物
2010年07月24日发布人:玲珑
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各位大侠 问下用C18硅胶柱150mm长分离不开杂质跟主药,换成250mm长能分开吗?,朋友,可以试下。。不一定能分开。。,虽然柱子长分离效果会好,但也不一定,也许能,也许不能。看你的样品。,你可以试试长柱子,也许和你选的流动相或流动相比
2010年06月14日发布人:ll5804
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[size=3] (2)分析3300~2800cm^-1区域C-H伸缩振动吸收;以3000 cm^-1为界:高于3000cm^-1为[/size]
[size=3] 不饱和碳C-H伸缩振动吸收,有可能为烯, 炔
2018年12月24日发布人:iTIANMING
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的咪唑浓度!
5、有可能没有平衡好柱子,蛋白没有挂柱
6、 Washing buffer 咪唑浓度太高,目的蛋白和杂蛋白一起被洗掉了
你最好能在纯化过程中,检测紫外,看看纯化情况,具体问题具体分析,蛋白很复杂的!
还有问题,希望我们
2013年12月28日发布人:langlang