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本人利用PGEX3X的载体表达GST融合蛋白,蛋白大小据推测应在80-90KD之间.表达蛋白通过谷胱甘肽柱子纯化,发现虽然在推测位置有一条带,但纯化出的大量蛋白在60KD左右
2014年06月09日发布人:wzqzy
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[size=2][color=Black][font=Impact]我得到的GST融合蛋白主要在包含体中,15ml菌液超声裂菌后用4M盐酸胍洗涤,再用6M盐酸胍溶解蛋白,后进行稀释复性,利用sepherose 4B纯化,跑SDS-PAGE
2014年05月26日发布人:杨过爱大米
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请问GST纯化时用高浓度GSSH洗脱会不会影响蛋白活性?100mM/ml的GSSH[/color][/size],[quote]原帖由 [i]nikonun[/i] 于 2013-11-9
2013年11月09日发布人:nikonun
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我用pGEX4T1融合GST表达我的蛋白,再用beads纯化。结果显示在纯化前,有我的目标蛋白,但是纯化后,仅在26KD附近有一条带,和GST大小差不多。请问高手们这是怎么回事啊? 结果见图
2013年07月31日发布人:nikonun
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我用pGEX4T1融合GST表达我的蛋白,再用beads纯化。结果显示在纯化前,有我的目标蛋白,但是纯化后,仅在26KD附近有一条带,和GST大小差不多。请问高手们这是
2013年11月18日发布人:lorri
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融合蛋白表达的不是很好,经sarkosyl处理以后是可溶的,用上清作纯化,做了两次什么都没洗脱出来.填料应该是没问题的,因为用来做空载体GST的纯化,洗脱出大量的GST.最近又用融合蛋白
2014年07月04日发布人:qiangren789
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[size=2][color=Black]求教各位大侠:我表达的蛋白带有GST标签,但是是以包涵体形式存在,因为要用有活性的蛋白做后续实验,所以我选择用8M尿素溶解包涵体,然后又梯度复性,但是复性后的蛋白怎么也挂不上GSTFF柱,因为
2013年10月11日发布人:静夜思
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protein-coupled receptor kinase interactor (green) counterstained
for F-actin (red) and DNA (blue).
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2009年10月16日发布人:999
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[size=2][color=Black]最近在表达一个蛋白,N端加了GST标签,C端加了HIS标签,分子量90kd左右,先使用GST,然后使用HIS亲和层析,但总有一条50kd左右的杂带无法去除,请大家分析一下,谢谢!
第一张图
2013年10月06日发布人:bs4665
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我现在在纯化GST重组蛋白(表达是费了一个月的时间,好不容易搞定了,汗),遇到一个问题,请大家指教!
我的重组蛋白是不可溶的,加上GST为66KD,我是先把它挂上 sepharose 4B
2014年05月24日发布人:utt0989