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1 冰上超声破菌,离心,上清过滤
2 用GE的Ni柱(1ml新柱子),20%乙醇洗,再用binding buffer(20mM磷酸钠 0.5M氯化钠 PH 7.4)平衡柱子
3 将溶解在binding buffer中的菌液上清上样
2013年10月31日发布人:#甜#
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[size=2][color=Black][b]
线粒体提取方法
1.收取细胞
2.PBS洗三遍
3.线粒体BUFFER洗一遍
4.线粒体BUFFER(加PMSF)洗一遍
5.分离BUFFER洗一遍
6.匀浆80次
2012年05月22日发布人:jujuba
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,这个现象也不是每次都有 就是感觉时不时的发生,所以很是费解~[/color][/size],[size=2][color=Black]
请问楼主的问题解决了吗?换个loading buffer试试?[/color][/size
2013年05月25日发布人:张先生
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],[size=2][color=Black]
这个有很多原因哈!
1、确定表达是你的蛋白
2、破碎情况
3、buffer 的PH值 这个很重要
4、binding buffer、Washing buffer、 Elution buffer
2013年12月28日发布人:langlang
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)上说这两个酶不能同时切(BamHⅠ有专门的buffer)。于是我做了两步切,每步胶回收,但DNA损失殆尽,连接时没接上。
我很是头疼,该怎么办? [/b][/font][/color][/size],[size=3][color
2011年10月07日发布人:mamamiya
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binding buffer和elution buffer梯度浓度了,结果没有改善。 我采用的是康为世纪的Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒,请帮忙分析原因,以及接下来如何优化?谢谢!!!!![/b][/color][/size
2013年06月03日发布人:KGZ564
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讨论讨论,
先看一个图
这是刚电泳不久的图片,大概6,7min的时候,
我们看到溴芬兰条带压的挺整齐的,
但是第一个marker孔还是弥散,
样品是用TCA沉淀的,溶解的buffer主要成分是:8M urea, 10mM
2013年07月27日发布人:=pkchen=
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[size=2][color=Black][font=Arial]
我要纯化一个带His标签的蛋白,但是无论如何都纯化不出来。我用的是Qiagen的Ni柱纯化的,用的是非变性的方法,试剂配制如下:
lysis buffer: 50mM
2014年02月12日发布人:水母
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loading buffer很稠,浓度比较高,而一般上样需要5×的loading buffer 2-4ul不等,尤其是新手,很难保证上样量的准确,很可能粘在枪头上的液体比你吸出来的还要多,而打出来的可能又要丢失一部分,一来二去,这样就会造成上样量的
2014年01月25日发布人:zsxan1990
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,一样的反应条件,一样的模板和引物,但是酶和buffer,dNTP,水都用另外一套,枪也用另外一套,结果电泳结果:还是一样,最后3个孔是阴性对照(由于这次用的普通TAQ酶,所以有非特异性条带) [/font][/color][/size
2011年10月21日发布人:ha111