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。自从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶被引入核酸研究以来,按相对分子质量大小分离DNA的凝胶电泳技术,已经发展成为一种分析鉴定DNA分子的重要实验手段。琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是基因操作的核技术之一,它能够用于分离、鉴定和纯化DNA片段。
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实验方法原理 本实验首先是制备植物新鲜组织匀浆、过滤,分离出完整的叶绿体,然后通过蔗糖密度梯度离心,把叶绿体与其他亚细胞结构分离开来。完整叶绿体经蛋白酶K酶解后,再通过酚-氯仿抽提获得高纯度的叶绿体DNA。实验材料 植物新鲜幼嫩叶片试剂
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酵母DNA分离1)酵母DNA微量制备(40ml)1.在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量(过夜)。2.将上述培养物移入螺盖离心管,用医用离心机或Sorvall SS-34转头以5000r/min
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氯化钠溶液中, RNA 核蛋白(RNP) 溶解度大, 而DNA 核蛋白( DNP) 溶解度较小; 相反, 在1
mol/ L的氯化钠溶液中, DNP 溶解度最大, 而RNP 溶解度却很小, 从而使DNA、RNA 核蛋白分开。核蛋白分离后
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凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%,DNA片段大小间于
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分离质粒时,可以将质粒去得很干净。方法为:先用TE之类的试剂将菌液悬浮起来,再用NaOH和SDS将菌液裂解(起裂解作用的主要是NaOH,但此时,SDS可以与蛋白很好的结合)。第三步,加入酸中合第二步中的碱,并且将SDS沉淀下来,同时
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某些特殊的目的,分别用不同的限制酶消化基因组DNA。切割DNA的条件可根据不同目的设定,有时可采用部分和充分消化相结合的方法获得一些具有交叉顺序的DNA片段。消化DNA后,加入EDTA,65℃加热灭活限制酶,样品即可直接进行电泳分离,必要时
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制备琼脂糖凝胶:按照被分离DNA分子的大小,决定凝胶中琼脂糖的百分含量;一般情况下,可参考下表:琼脂糖的含量(%) 分离线状DNA分子的有效范围(Kb)0.3 60-50.6 20-10.7 10-0.80.9 7-0.51.2 6-0.41.5 4-0.22.0 3-0.1琼脂糖凝胶的浓度一般从0.5%到~2都可以,1%最常用,这里单位是g/100mL。
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近代质粒DNA分离纯化以从大肠杆菌中分离为代表,鉴于大肠杆菌(E.coli)在分子生物学研究中的重要地位,从大肠杆菌(E.coli)中分离纯化质粒DNA(Plasmid DNA)成为超离心技术中一个重要课题。而质粒DNA的快速分离纯化
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无性繁殖的基因文库,再结合筛选方法,从众多的转化子菌株中选出含有某一基因的菌株,从中将重组的DNA分离、回收。这种方法也就是应用基因工程技术分离目的基因,其特点是绕过直接分离基因的难关,在基因组DNA文库中筛选出目的基因。可以说这是利用“溜散弹