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新手做qRT-PCR,迂到困难,请各位战友不吝赐教,不胜感谢!
质粒转染细胞后提取总RNA,反转录得到cDNA做模板,SYBR green法定量PCR,但发现内参(beta-actin)的Ct值高于目的基因的Ct。即
2023年02月24日发布人:woshi
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说是成像术,其实就是拍照,从最常规的简单的EB染色,CBB染色,到荧光成像,化学发光,再到最危险的同位素成像等,原理都是差不多,即条带和背景之间信号的差异,只是过程和要求不同
2014年04月14日发布人:minran_1980
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.,恩,请问PL是什么,像这种体块的晶体做课以做透射和扫描吗,光致发光。扫描要求不高,透射的话估计要做成小薄片或者粉末样,你可以找找材料测试的书看看。,内部空隙缺陷可以通过密度测试和工业CT表征吧?,工业CT是工业用计算机断层成像技术的简称
2015年12月27日发布人:双子座
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[size=2]小弟最近在做荧光定量PCR,发现无论是actin还是目的基因的CT值都很高(30多),目的基因30多也就罢了,actin不会这么高啊! 我先后做过以下调整:
1、增加模板浓度,稀释10倍、5倍、2倍,不稀释的都试过
2015年07月03日发布人:铜雀
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表达的改变,RT 和real time PCR 的kit都是TAKARA,PCR结果让我更是糊里糊涂,内参的CT值(30~33)竟然比所有的基因ct值(28~32)都高,不知道什么原因,也不知道哪步出错了.荧光定量PCR完我把所有的孔拿回来
2015年12月04日发布人:bring
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据roche一位工程师说样品扩增Ct值超过33个cycle就没有意义(没有意义具体是什么概念也不明白)了,定量标准品最低浓度的也要Ct在33以上,请问大侠是否有道理?为什么?有公式可以推导么?好像很多临床样本定量结果
2015年07月01日发布人:黄花菜
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[color=Olive][size=4][font=楷体_GB2312][b]请问荧光定量(相对定量)比较Ct中如何计算扩增效率[转自 丁香园论坛]
我用 Analysis of Relative Gene
2011年08月24日发布人:还是孩子
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我是做荧光定量的新手,今天发现,Ct值都很大,超过30,且溶解曲线的峰值出现在60-70之间,扩增片段不超过200.不知道为什么,跑琼脂糖电泳后发现均有带,如果是表达量少的话,这样的结果可靠吗?[/size
2016年01月08日发布人:yes4
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首先介绍一下背景:
我做的是人群,分为暴露人群和对照人群,然后采集其外周血取淋巴细胞测相关基因的表达。
RT-qPCR得到的结果包括Ct,ΔCt。由于暴露人群和对照人群只是大体的分组,并未进行一一配对,所以无法得到
2015年07月01日发布人:PCR
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[size=2][font=黑体]Real-time已经做完,最近却又为统计犯愁了。两组动物,一组是对照组,n=8;另外一组是给药组,n=8。试图对比基因X的变化。采用b-actin作为内参,使用2-△△ct 法。
对照组的△ct值(n
2015年06月03日发布人:黄花菜