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都能转干净,因些分析原因有下面几个:
1、我做三明治时出现了问题?一般我做三明治可能赶气泡不是特别的干净(教训啊),但是也不至于会全部都转不
2014年01月24日发布人:张先生
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不知道为什么会有这层密集的细气泡,该如何避免呢?[/font][/color][/size],[size=2][color=Black]
气泡应该是SDS,应提前配制好,放在4°C几个小时,气泡就会消失,赶气泡的时候,用平头镊子按住一边,防止三明治移动,加转膜液润湿三明治,然后用玻棒从这边轻轻地向另外一边赶,赶几次应该就可以了。[/
2014年03月21日发布人:shenkunjie
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=Black]
我通常用恒压,100v, 60 min,效果还可以。
转膜缓冲液最好用新配制的,加上预染MARKER吧,可以监测一下转膜的情况,具体操作大家的可能差不多,多注意一下细节问题就是了,比如说在作“三明治”的时候注意一下速度,冰块降温,根据蛋白的大小和实验室的具体情况选择不同的膜等等。
在刚开始作WB的时候摸条件是
2013年10月10日发布人:鹿奔奔
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实在滤纸跟膜之间的![/color][/size],[size=2][color=Black]
转膜前要充分赶气泡,另外也许你的三明治不够紧,可以考虑增加滤纸
另外注意冰浴散热降温问题[/color][/size],[size=2
2014年02月10日发布人:ffaa
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是缓冲液的问题,今天,重新配了电泳液 缓冲液,上样60ug,转膜后marker 很不清楚,丽春红染后蛋白也不清楚。转膜电极没接反,做三明治时液很好赶气泡了。为什么同样的同样的条件,以前转的很好,现在却出现这种问题,我反复差了几次 ,就是找不到
2014年03月27日发布人:veiwu
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300mA,1h;我也试过,不行?
请高手指点![/font][/color][/size],[size=2][color=Black]
按你说的条件,转膜应该没有问题,你要检查一下
1、要保证转膜三明治的顺序,膜和胶放反了肯定
2013年06月05日发布人:avi317
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),电泳后marker在胶上清晰可见,最小分子量的一条marker为10kd也可以清楚看到,我的目的蛋白hBD2分子量为7kd(abcam一抗,说明书上提示该产品分子量为7kd),故电泳后切胶时,在10kd以下切1cm宽的胶进行转膜;“三明治
2014年03月11日发布人:@STAR@
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,实验室有的老师是15 min×3,哪个都是将近一小时,最后做出来的效果还好,很多都已经发了文章了,所以应该不是洗膜时间太长造成的。
仅见b-actin有一个条带,我认为可能是你的转膜出了问题。三明治没有做好,膜与胶的接触、有气泡都可
2013年10月15日发布人:阿司匹林
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电泳用150v,大概整个跑下来40分钟到1小时的样子,
胶跑好后的转膜过程是:
1..膜剪好后先在甲醇中浸泡10分钟左右,
2.铺“三明治”,转膜液用的是20%甲醛的,湿转
3.电泳和转膜用的都是biorad的机子,
4.铺好后
2014年02月08日发布人:remonte
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1.3左右就可以了!
当然经验是很重要的,你可以尝试几次!,有1微升的进样器,比较准确,取样时要注意,预吸几次,吸进要慢,排出要快,手动进样器的话,一般不用那么麻烦。用5uL的进样器吸1uL,再吸点空气就可以了。
如果你非用“三明治
2009年10月14日发布人:lovesci