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蛋白质翻译后修饰分析策略
含量很低,因此在分析前必须对其进行分离和富集。目前,常用的磷酸化蛋白质的分离和富集技术包括固定化金属亲和色谱(IMAC)、免疫沉淀(IP)、强阳离子交换(SCX)色谱、强阴离子交换(SAX)色谱、反相
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蛋白全谱分析
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TMT定量
、标记完成后,混合样品,用SCX进行组分分离(15-20组分);5、对每个组分进行LC-MS分析:6、蛋白质鉴定与定量分析,筛选差异表达的蛋白;7、生物学实验验证(Western blot,EUSA等
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蛋白全谱分析
。此外,将全谱分析数据和转录组数据结合,可相互补充并共同验证基因注释。 技术特点 高效率样品分离:根据样品性质,可以选择SDS-PAGE或者SCX-HPLC两种分离方法。两种分离方法的选择
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iTRAQ
处理、以及不同组上机造成的实验误差。 高效率样品分离:进行SCX-HPLC分离,实现自动化操作。 高鉴定率:系统全面地研究组织或细胞中尽可能多的蛋白质,可鉴定多达6000种蛋
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iTRAQ
,提取肽段; 3、用不同质量数的iTRAQ/TMT标签分别对肽段样品进行标记: 4、标记完成后,混合样品,用SCX进行组分分离(15-20组分); 5、对每个组分进行LC-MS分析
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TMT
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iTRAQ定量蛋白质组学
,混合样品,用SCX进行组分分离(15-20组分);5、对每个组分进行LC-MS分析:6、蛋白质鉴定与定量分析,筛选差异表达的蛋白;7、生物学实验验证(Western blot,EUSA等):蛋白质组
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定量蛋白质组学iTRAQ技术服务
sHCC三个不同的组织来源。提取蛋白后,分别用115,116,117来标记,混合蛋白并经过SCX柱液相分离后,zei后进入液质系统进行蛋白质谱鉴定。 Ø 结果 共有1951个蛋白被定量,在1.25倍p
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修饰蛋白质组学
PRM(平行反应监视,parallel reaction monitoring)是一种基于高分辨、高精度质谱的技术,能够对目标蛋白质、目标肽段进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。
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