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免疫荧光相关实验
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免疫荧光
免疫荧光细胞免疫荧光染色免疫荧光:1.材料准备1)盖玻片.载玻片盖玻片 水洗 浸泡于75%的乙醇溶液超声波 泡酸载玻片 水洗 无水乙醇浸泡 烘干2)试剂a.固定液b.透膜液c.封闭液d.一抗
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细胞免疫荧光
,72度溶解)b.透膜液:0.2%或0.3%triton X-100, 甲醇+丙***(V:V=1:1)c.封闭液:5%BSA以上试剂除甲醇+丙***外均用PBS配制d.一抗
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细胞凋亡实验步骤
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石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光
*甲*醛(pH7 4的PBS)室温固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;⑤浸入封闭液(3%H202)室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的
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石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡荧光
.甲.醛(pH7.4的PBS)室温固定15-30 min,PBS漂洗3×5 min;⑤浸入封闭液(3%H2O2)室温封闭10 min,PBS漂洗3×5 min;⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的
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有效靶点筛选
蛋白转移到PVDF膜上。 4) 免疫显色: a) 封闭:用封闭液(含5%脱脂牛奶的TBST溶液)室温封闭PVDF膜1h。 b) 一抗孵育:封闭液稀释抗体,然后与封闭好的PVDF膜室温孵育4℃过夜
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石蜡冰冻切片TUNEL凋亡
封闭液(3%H202)室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;⑥加入适量TdT酶反应液,暗湿盒中37°C反应1 h,用SSC室温15 min终止反应后,PBS漂洗3x5 min; .⑦浸入
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TUNEL凋亡
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Western blot/免疫组化/microRNA
颜色来判断是否转印完全或转印过 头是不可靠的。五、免疫杂交反应 1、将膜移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭1h即可。如果是自己配置的封闭液,最好过滤一下以消除固体杂质。实际经验表明与其
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