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免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术,在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物,然后利用抗原-抗体的特异性反应,从蛋白混合物中检测出目标蛋白,从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况
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蛋白质印迹是生化实验室中最常见的程序之一。基本上,它从大小上将蛋白质与样品分开,然后使用抗体进行测试以确定是否存在给定的蛋白质。它不仅在研究中有用,而且在医学或诊断实验室中也有用。例如,针对HIV和莱姆病的检测均包括酶联免疫
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蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
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01基本原理免疫印迹(Western
Blot) 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。SDS-PAGE
可对蛋白质样品进行分离,转移到固相载体——例如硝酸纤维素薄膜(NC)上。固相
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免疫印迹法 (Western blotting) 是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点,是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法,如组织抗原的定性定量检测
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结合,而其它蛋白质不与一抗结合,这样清洗去除未结合的一抗后,印迹中只有待研究的蛋白质的位置上结合着一抗。处理过的印迹进一步用适当标记的二抗处理,二抗是指一抗的抗体,如一抗是从鼠中获得的,则二抗是抗鼠Ig
G的抗体。处理后,带有标记的二抗
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基本原理 将混合抗原样品在凝胶板上进行单向或双向电泳分离, 然后取固定化基质膜与凝胶相贴。在印迹纸的自然吸附力、电场力或其它外力作用下, 使凝胶中的单一抗原组份转移到印迹纸上, 并且固相化。最后应用免疫覆盖液技术如免疫同位素探针或
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实验概要免疫印迹是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测样品或提取物中某种特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝胶紧贴着膜放置,在电流的作用下蛋白质从凝胶迁移到膜上并且被固定,常用的膜是硝酸纤维素或 PVDF(聚偏乙烯氟化物)。膜是凝胶蛋白质的复制品,然后
2019-04-19
来源: Everlab云端实验室
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颇尔公司免疫印迹 PVDF 转印膜:通用性强,无需为蛋白的分子量大小而担忧,从几 KD 的小蛋白到上百 KD 的大蛋白通用;经过优化的膜,专门适用于免疫印迹实验,背景低,灵敏度高,适用于小肽段;极低的蛋白穿透率,蛋白结合能力强,通常比尼
2022-04-03
来源: 颇尔(中国)有限公司
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染色以检查转膜效果,或减少洗膜次数,缩短洗膜时间;②抗体不匹配或一抗过期或一抗不能识别变性或还原的蛋白质,应注意选择特异性的抗体并在有效期内使用,或改用非变性凝胶系统;③抗体浓度低,应适当增加抗体浓度,或延长孵育时间;④样品中的目的蛋白质含量