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贝勒医学院等机构的研究人员在《Nature》发表的一项研究显示,缺失Dna2后,小DNA片段就会从整个基因组中跳跃到染色体断裂处。这种新机制可以解释癌症或抗体多样化过程出现的类似事件。 “我们实验室的兴趣之一是了解DNA复制的基本
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细胞具有许多保护基因组完整性的机制,包括修复在DNA复制过程中可能发生的错误的过程。酶Dna2参与DNA修复,但是人们对它的缺失对染色体不稳定性的影响知之甚少。在一项新的研究中,来自美国贝勒医学院等多家研究机构的研究人员揭示出当
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Chen博士)在Nature杂志上发表了题为Dna2 Nuclease Deficiency Results in Large and Complex DNA Insertions at Chromosomal Breaks的研究论文,报导了
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降解后有增色效应,因此有时此法测定的结果会高于定磷法。二、实验材料、仪器及试剂1、材料 植物DNA2、器材:紫外分光光度计、移液管、试管3、试剂:TE溶液(pH8.0)(见前述)三、操作方法将纯化的DNA溶液用TE(pH8.0)稀释至每毫升
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仪器:1 材料:质粒DNA2 试剂:限制性内切酶、ddH2O3 仪器:微量移液枪,离心机,水浴锅, 电泳仪,紫外透射观测仪实验程序:I. .单酶切:II. 双酶切:注:酶切的选择原则一般是尽量扩大酶切体系,这样抑制因素得以稀释;基因组DNA
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,轻轻颠倒几次。最大速度(13, 000 rpm)离心5min;⑩ 除去乙醇,在超净台上平放,将管壁上的乙醇挥发掉,20~40μl ddH2O溶解。-20℃保存。4、连接。体系如下:DNA2μl10×buffer10μlT4 ligase 1
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(ethidium
bromide, EB )进行检测,溴化乙锭嵌入碱基对之间形成荧光络合物,在紫外线激发下发出红色荧光。仪器与主要试剂:仪器:1) 电泳仪2) 水平电泳槽3) 紫外检测仪主要试剂:1) 提取的质粒DNA2) 5×TBE
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影响拆分结果,具体可包括如下几个因素:1,低拷贝/降解DNA2,扩增效率:DNA模板量,PCR试剂盒3,DNA分型质量:Stutter峰、Pull-up峰、等位基因覆盖、等位基因缺失、等位基因插入(污染)、 峰不均衡性, 峰值变异性等现象
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叶绿体DNA2次。加入1倍体积的酚(以TE饱和),颠倒小管数次混匀。室温下5000r/min离心10min,使两相分离。收集上层溶液,再用1倍体积的酚-氯仿(1∶1,V/V)抽提一次。14.将DNA溶液(水相)转至一个30ml的离心管中,加入
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,简称CCCDNA),开环质粒DNA,即共价闭合环状质粒DNA1条链断裂,(open circular DNA,
简称OCDNA),线状质粒DNA ,即共价闭合环状质粒DNA2 条链发生断裂,(linear DNA,简称L
DNA)。这