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在膜上的待测核酸单链在一定温度和条件下进行复性反应的过程。杂交反应结束后,应进行洗膜处理以洗去非特异性杂交以及未杂交的标记探针,以避免干扰特异性杂交信号的检测。膜洗净后,将继续进行杂交信号的检测。以放射性标记探针与固定在 NC 膜上的核酸
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,常规应用不易。2.固相杂交固相杂交是先将待测核酸样本结合到固相载体上,再与溶于溶液中的检测杂交信号后分析杂交结果。固相杂交的基本程序是:①准备待测样本;②制备和标记探针;③固相载体的处理;④预杂交、杂交、漂洗;⑤杂交信号检测;⑥结果判断及分析。
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核酸分子杂交可分为液相杂交和固相杂交。1.液相杂交液相杂交是让DNA探针和待测核酸在溶液中进行反应。在溶液中,待测核酸和探针均自由运动,增加了两者结合的机会,因此液相杂交要比固相杂交快5~10倍。但液相杂交不易分离杂交体和游离核酸探针,常规应用不易。2.固相杂交固相杂交是先将待测核酸样本结合到固相载体上,再与溶于溶液中的检测杂交信号后分析杂交结果。
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实验材料 杂交信号试剂、试剂盒 生物素SSC荧光素亲和素仪器、耗材 离心机培养箱实验步骤 1. 用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤,进行第一轮杂交信号检测。 2.
如切片已承加盖玻片并密封。可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油
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基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下
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方法较为繁琐,但却优先使用,因为某些批号的带正电荷的尼龙膜经此处理后,杂交信号可以增强。然而为获得最佳效果,务必确保尼龙膜不被过度照射,适度照射可促进RNA上小部分碱基与尼龙膜表面带正电荷的胺基形成交联结构,而过度照射却使RNA上一部分胸腺嘧啶共价结合于尼龙膜表面,导致杂交信号减弱。
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NC膜只可以和单链rna.dna在高盐条件下结合,与dna分子非共价键结合,易丢失dna.而且NC膜很脆,易断,不能反复使用,对于小片段<500bpDNA无效,优点是对探针和蛋白质吸附作用较弱,杂交信号本底低。尼龙膜可以与单链及双键
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实验材料杂交信号试剂、试剂盒地高辛SSCBSA荧光素仪器、耗材加湿盒水浴锅培养箱实验步骤1. 用地高辛标记的探针与切片杂交并洗片(见“荧光原位杂交实验”基本方案步骤1~6)。 2. 加50 μl 10 μg/ml 的羊抗地高辛抗体
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(1)样品制备和标记 为了获得目的基因的杂交信号必须对目的基因进行标记,由于目前常用的荧光检测系统的灵敏度还不够高,为了提高检测灵敏度,需要在对样品核酸进行荧光标记时,对目的基因进行扩增。生物样品成分复杂,往往含有较多的抑制物,在对样品
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:它更便宜,杂交中更耐用,干燥过程中不易变形和碎裂等。然而若变性过程不小心,杂交信号的强度会明显弱于用硝酸纤维素滤膜时所得到的信号强度。因此,常规的细菌筛选和各种杂交时仍选用硝酸纤维素滤膜作为固相支持体。 Southern杂交可用来检测经