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将固定于膜上的DNA片段与探针进行杂交之前,必须先进行一个预杂交的过程。因为能结合DNA片段的膜同样能够结合探针DNA,在进行杂交前,必须将膜上所有能与DNA结合的位点全部封闭,这就是预杂交的目的。预杂交是将转印后的滤膜置于一个浸泡在
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。(3) 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。(4) 让探针与同源DNA片段杂交,然后漂洗除去非特异性结合的探针。(5) 通过显影检查目的DNA所在的位置。Southern杂交能否检出杂交信号取决于很多因素,包括目的DNA在总DNA中所占的
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杂交 (1)将膜浸入5×SSC 中2min,将膜放入干净的塑料袋中。 (2)将预杂交液事先在65℃ 预热,然后将10 ml 预杂交液加入袋中,封口。 (3)65℃预杂交1h 以上,不时摇动。 5.杂交 (1)取出杂交袋,剪去一角去除
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。(3) 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。(4) 让探针与同源DNA片段杂交,然后漂洗除去非特异性结合的探针。(5) 通过显影检查目的DNA所在的位置。Southern杂交能否检出杂交信号取决于很多因素,包括目的DNA在总DNA中所占的
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0.5-2小时。(4) 用下列两种溶液之一进行预杂交,时间为1-2小时。若于42℃进行,应采用: 50%甲酰胺,5×SSPE,2×Denhardt's试剂,0.1% SDS;若于68℃进行,应采用:6×SSC,2×Denhardt'
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限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤:(1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。(2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。(3) 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异
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中文名称预杂交英文名称prehybridization定 义在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭,用以降低探针在膜上的非特异性结合。封闭试剂成分主要是大量的非同源性的核酸或蛋白质等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
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一、核酸探针预杂交预杂交的目的是用非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其他高分子化合物(Denhart’s溶液)将待测核酸分子中的非特异性位点封闭,以避免这些位点与探针的非特异性结合。杂交反应是使单链核酸探针与固定
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) 去除纸巾等,用蓝色圆珠笔在滤膜右上角记下转移日期,做好记号,取出滤膜,在2×SSC中洗5分钟,凉干后在80℃中烘烤2小时。注意在使用尼龙膜杂交时,只能空气干燥,不得烘烤。 (6) 将滤膜放入含6-10ml预杂交液的密封小塑料袋中,将预杂交液
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滤膜或尼龙膜)上。 (3) 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。 (4) 让探针与同源DNA片段杂交,然后漂洗除去非特异性结合的探针。 (5) 通过显影检查目的DNA所在的位置。 Southern杂交能否检出杂交信号取决于