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目的蛋白!但用6*HIS tag标签抗体做western blot发现出现目的条带的确是14KD左右的蛋白!见图!这是为什么呢?将14KD蛋白切下做质谱鉴定并非所需目的蛋白!
望大侠们赐教![/b][/color][/size],[size
2013年04月27日发布人:pengke1983
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[size=2][color=Black]
最近作原核表达,目的蛋白有诱导且量不大,但跑胶目的蛋白上方还有一个大片段条带很亮,过Ni柱去不掉,用HIS抗体WB检测并没有信号,说明此片段没带HIS标签,下面的小片段WB有信号,可能是降解
2014年05月10日发布人:am10
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?
请各位指点一下.谢谢了.[/font][/color][/size],可以用his抗体做WB来确定啊,[size=2][color=Black]过个NI亲和柱,看看能不能被亲和与特异性洗脱(咪唑)[/color][/size],[size
2013年12月28日发布人:红茶可乐
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带有his-tag的条带显现出来,和his抗体作western blot 一样,省去很多步骤。想问问有没有同学用过?效果怎样?[/font][/color][/size],[size=2][color=Black]
可以直接去英骏
2014年04月01日发布人:马大牙
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不同的纯化kit吗?
另外,his抗体的二抗选用什么好啊?[/size][/color],[size=2][color=Black]一样,无所谓什么纯化系统,大多都用镍柱,未必一定用试剂盒,但是如果是包涵体的当然需要变性条件下去纯化
2014年05月20日发布人:caihong
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[size=2][color=Black][b]我去年做了一两千个western blot 什么事都遇到过了,技术超强,有问题只管问, 但是我的时间有限, 问问题最好能具体点,我才好回答。请尽量用帖子发,这样会有更多人受益!
sean
[/b][/color][/size],[size
2023年07月08日发布人:NBA
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超声破碎,而超声破碎的功率、次数等又是需要摸条件吗?一般怎么设梯度?
如果想通过WB检测目的蛋白,就需要订一抗和二抗,,我用的是PET载体,那么一抗就用抗HIS标签的抗体,大家都选择进口的还是国产的?
等各位大虾回复![/b
2013年12月16日发布人:雪山飞鹿
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]不知道战友求助的是哪方面,如果是研究mRNA表达蛋白的点杂交,少量的话要用到His-tag以及地高辛抗体,这个在分子克隆指南里面有,就不多说了,大量的话要用蛋白芯片,即多个蛋白的点杂交,这个现在相关文献也很多。
如果研究蛋白和它抗体的点
2013年05月11日发布人:bohe221
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[size=2][color=Black][font=黑体]在学校做了2年,在一家抗体公司做了5年多的抗体和抗原纯化,经过我的手或者下面员工的手,纯化过的抗体不下几千个了,如果以重量计估计要以斤算……
单抗,多抗
IgG
2014年09月05日发布人:蒜泥面条
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包括: a)将带有特定基因和6×His的真核细胞表达质粒免疫动物,产生含有基因特异性抗体的血清或卵黄免疫球蛋白粗提物; b)将该质粒在体外转染真核细胞或制备原核表达质粒转化原核细胞,培养后将细胞裂解液加到金属离子螯合树脂柱,由于重组蛋白带有6
2015年01月21日发布人:fei1226com