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[color=DarkSlateGray][size=4][font=仿宋_GB2312][b]求助:多重荧光定量PCR体系优化[转自 丁香园论坛]
我准备做两重taqman荧光定量PCR,将两对引物放在一起走了荧光定量曲线,用
2011年08月13日发布人:七彩星星
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设计了引物,那么这个引物的工作液浓度应该怎么确定呢?在整个体系中其他个组分的量又如何确定呢?[/size],[size=2]看分子克隆标准PCR体系,再优化[/size],[size=2]通常在你购买的聚合酶说明书
2015年02月13日发布人:dodoit
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漏了 [/quote]
[size=2]谢谢,但是marker看起来似乎是没有问题的呀~[/size],[size=2]PCR扩增的产物有问题,重新跑PCR吧,优化下体系[/size],[quote]原帖由 [i]pou[/i] 于
2014年10月27日发布人:bongte
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。[/size],[size=2]先分析基因序列撒。GC含量过高或是有发夹结构再做打算。[/size],[size=2]
目的条带不清楚,可以针对PCR反应体系做优化;
二聚体可以从退火温度入手,适当提高以下退火温度
建议上图
2015年03月16日发布人:mamamiya
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[size=5][font=新宋体][b]RT-PCR讨论区 [转载]
大家做RT-PCR的比较多,我认为有必要建立一个专区,这样大家能在这里有目的地交流。现搜集了一些帖子,供大家学习参考,更欢迎同胞们踊跃提问,积极发言~希望
2014年04月23日发布人:荷塘青蛙!
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[size=2]最近要做DNA回收~一直在做体系的优化~想减少一些杂带和引物二聚体~
这是今天我做的pcr电泳图
大致信息如下:
mark:D2000
3种引物都是简并引物
DNA模板相同
退火温度是筛选过的
体系都是
2015年03月11日发布人:牛顿
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什么都没有,不知道什么原因。谢谢![/b][/size],[size=2]首先,生物公司合成的引物也不一定就百分百成功啊。
其次,你提取DNA的质量怎么样,不敢保证。
再次,PCR条件可能不合适,需要优化一下,包括PCR的体系,如果有复杂
2014年10月28日发布人:zzzz
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PCR反应体系中为什么有的加入二甲基亚砜?它能起到什么作用?[/size],[quote]原帖由 [i]join[/i] 于 2015-11-7 11:35 发表 [url=http
2015年11月07日发布人:join
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PCR反应体系中为什么有的加入二甲基亚砜?它能起到什么作用?[/size],[size=2]一般的PCR体系中不需要加入二甲基亚砜,但是有些PCR反应体系中加入二甲基亚砜,它作为一种辅助成分可以提高反应的特异性和产量
2015年10月10日发布人:白白的
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[size=2]图不清楚,请教高手给分析一下原因[/size],[size=2]优化下PCR反应体系,退火温度是不是低了点/[/size],[size=2]
既没有给出实验条件,也不说明遇到什么问题,这样的提问太不负责任
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2015年04月03日发布人:bgf5