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[size=2][b] PCR条带太浅,试了很多原因都没有改进。直接上图,求大神指教[/b][/size],[size=2]
1. 是不是你的胶染色不行啊,连marker都挺浅的,加大染料的用量试试。
2. 你PCR几个循环啊,加大循环
2014年10月26日发布人:boom
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都是由聚合酶造成的吧,若是产物跑胶回收时在紫外下暴露时间过长,也很容易造成突变的。[/size],[size=2]
我们都是用PFU,实在p不出来的东西才用LA,有时候还会与PFU混用。
还有PCR循环数越多,其突变的几率越大,所以我们最多不超过30个循环。[/size],[size=2]
2015年06月03日发布人:txwuyan
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配了试试,PCR没见到有明显条带, 暂时没法知道PCR是否成功,目的DNA片段是658bp吧?[/size],[size=2]
拖带很严重,建议减少PCR循环次数或者降低模板量。[/size],[size=2]
主要是PCR问题,建议把
2015年01月13日发布人:33号
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][/size],[size=2][font=黑体]PCR体系如下(25微升): PCR循环如下:
ddH2O:10.1
2015年03月10日发布人:阿拉蕾
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,这时候扩增效率会有所改变(而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值)。因此最好能够把ct值往前移。
解决办法可以将模板加以浓缩或
2014年07月29日发布人:挖挖挖
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你的引物带很明显,我觉得60-70之间的峰,应该是引物的峰,可能因为引物峰高,而后面的产物峰反而被盖过看不出来了。[/size],[size=2]
我跑琼脂糖胶后,引物带不明显,几乎看不出来,倒是目的片段带明显。我用10μm的引物,加了0.4μl,不知道是怎么回事。[/size],[size=2]
你的引物浓度用的不高。
你跑琼脂糖胶的PCR循环数用的是
2016年01月08日发布人:yes4
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[size=5][color=Black][font=楷体_GB2312][b][求助]半定量PCR !
我目前正在作半定量PCR,以b-actin为内参,想请教内参的PCR循环次数是否应该与目的片断一致,如果目的片断需要较多的
2011年10月21日发布人:bananapeople
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Master Mix ),PCR循环条件:
94℃预变性3min,进行如下循环:94°变性30S
55°退火30S 72°延伸30-40s, 30个循环, 最后72°延伸5min
望各位高手指导啊,谢谢 [/b][/font
2011年08月24日发布人:海鸥crazy
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[size=2]1.我需要做RT-PCR,目的是半定量的差异比较,听说做半定量的比较循环扩增
在平台期前结束,请教如何确定RT-PCR的循环次数?多少个循环合适?
2. 还有一个傻问题我这的凝胶成像系统只能成像,但不能测定灰度值
2016年02月09日发布人:@STAR@
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!![/size],[size=2]
1.markers都未能跑好,凝胶浓度可能欠缺,在1.5%左右较好,现配现用
2.PCR体系用高质量的聚合酶,如Ex Taq可能效果更好.
3.ISSR对DNA模板质量要求高,最好没有降解的DNA
4.PCR循环数在35个左右,延伸时间根据条带大小控制在1Kbt条带在1min左右,不宜过长时间,退火温度要进行梯度优,确定最
2015年03月10日发布人:科技化