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重点在于DNA的纯度,即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。
使用两者的细节:
1:蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml;
2:RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶
2011年09月02日发布人:finger
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[size=2][color=Black]
在提取质粒电泳检测时发现在最亮的一条带前边(比最亮的带小的)有一条弱带。不知道是怎么出现的?
该质粒经PCR和酶切鉴定都是正确的[/color][/size],可能是RNA污染,可加
2014年03月25日发布人:mimili_901
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普通的胶跑RNA检测一下质量是完全可以的。跑不出漂亮的图,两方面的原因:
1.本身RNA提的质量就不高
2.电泳时,最好使用新胶,新的电泳缓冲液(我曾经用过旧的胶,结果本来效果很好的RNA在跑的时候就降解了,RNA酶污染的太厉害
2011年10月21日发布人:小妖儿
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污染,建议加一点RNA酶处理一下,再次纯化质粒后再定量。因为你这个是要用来做绝对定量标准品的样本,定量还是准确一点好。,大概你的质粒抽提时有RNA污染,建议加一点RNA酶处理一下,再次纯化质粒后再定量。因为你这个是要用来做绝对定量标准品的样本
2011年08月22日发布人:小荷尖尖
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(提取RNA,要特别注意RNase 酶污染哦)![/size],[size=2]
细胞里的RNA我提出来了。提取RNA一定在细胞里才有吗?病毒呢?[/size],[size=2]
RNA分为mRNA,tRNA,rRNA.mRNA在细胞核内存在时间极短,成熟的mRNA会移到细胞质.tRNA是细胞内分子量最小的一类
2015年09月04日发布人:小螺号
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的也出现了类似情况[/size],[size=2]
模板可能有降解,建议避免反复冻融,放置时间不能太长。
抽提RNA时有污染,包括基因组DNA污染和蛋白质污染,需重做抽提。
提高退火温度,减少非特异性扩增。
减少循环次数,减少非特异
2015年03月11日发布人:ilovegaga
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100ug/ml就可以了。另外,RNase A容易失活,最好能确定其是否失效。,不需要管 过几天就没了。。。RNA太容易降解,要快就加RNase吧,最好溶解的时候用加有RNAse的水溶解就好了。,用试剂盒吧,方便也便宜,从没发现RNA的污染
2015年01月25日发布人:zouyou
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仪,得出核酸的浓度大约在100-200ng/ul。浓度还可以,但是260/280的比值在1.9-2.0.显然是有RNA污染的。跑了个胶稍微有点拖尾。由于当时手里没有RNA酶,所以就没有管RNA的问题。直接进入下一步。
2.C到T转化
2011年08月20日发布人:大猫
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temperature. J Mol Biol 5, 109-118.
一般可以用热变性发测定,也可以用HPLC测定,得自己好好看下书。,熔点法应该就是热变性温度测定法(Tm法)吧。
1. 所用DNA是基因组DNA,且无RNA污染,用紫外
2015年07月13日发布人:rrra6
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提的RNA,最上面是DNA污染,一定要把DNA除干净,要不不管定量还是半定量都是不准确的
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哇噻,很好啊,怎么提的?
不过从条带的亮度来看
最上面那条是gDNA
下面的两条是28S和18S
2015年04月02日发布人:HP007