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[color=Black][font=楷体_GB2312][b][size=4][精华]】RealTimePCR问题专贴--请先看P1的问题汇总
开个帖子,有定量PCR相关的问题可以提问,如果有类似/雷同的问题我会整理在一起
2011年10月16日发布人:潇湘子
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][/size],[size=2]
血清中有RNA?请教![/size],[size=2]
1:1或者1:2
都可以[/size],[size=2]
楼主,血清中是没有细胞的,没有细胞怎么提取RNA呢?你首先确定血清,血浆和全血的
2015年09月04日发布人:小螺号
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~2.0kb,另外在18S前还可以看到5S。如果RNA质量好,28S和18S的比例大约是2:1,如果RNA降解,则除了条带不清楚,可以看到EB主要显示位于18S前。至于MARKER,如果你有,那可以加,但是不必强求,因为基本两个条带大小是固定
2011年09月20日发布人:逍遥燕子
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],[size=4][color=Purple]你的内对照β-actin都没有出现PCR产物。可见你以前每个环节包括RNA抽提,RT,PCR都有可能有问题。
我的建议是:
1.所有要用的器具都严格用0.1%DEPC处理.
2.从RNA抽提,到RT,到PCR要一路做下来,别停,甚至可以不用测CD,更何况
2011年10月04日发布人:园丁##
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[size=4][color=Navy][font=楷体_GB2312][b]提RNA过程影响纯度和质量的关键是否在TRIZOL和氯仿这两步? [转载]
用TRIZOL作用20分钟后,转裂解液入EP管,加入1/5体积氯仿, 剧烈
2011年10月12日发布人:少林弟子
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与氯仿分层都不明显; 而只有1管分层明显; 提RNA结果分层不明显的管RNA比值都在1.3左右,而分层明显的管比值在2.0.这个对比说明什么问题呢?操作有什么技巧吗?提RNA的得率和纯度总是不稳定,有时高,有时低,而我们科室有个师姐每次提
2015年08月03日发布人:H2O
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你的RNA跑一个电泳,看有没带出现。[/size],[size=2]
你的内对照β-actin都没有出现PCR产物。可见你以前每个环节包括RNA抽提,RT,PCR都有可能有问题。
我的建议是:
1.所有要用的器具都严格用0.1
2015年12月01日发布人:yonger
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[size=2]做realtime有段时间了,现在有几个疑问请教大家,
一般提取组织RNA后都会测量浓度,然后根据RNA浓度调整体积,使得进行转录的RNA总量一致,最后得到的cDNA就不再测浓度,直接加1ul进入25ul的
2015年06月03日发布人:中国特色
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[size=2]
今天提RNA,跑电泳后感觉28s,18s,5s都不错,28s和18s都挺亮的,但就是在28s上面还有一条清晰的条带,不知道什么原因,用rna酶处理后所有条带消失,证明应该不是DNA污染,请高手指点?[/size
2015年09月04日发布人:langlang
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[size=2][color=Black][font=黑体]我最近在提取肝细胞和心肌细胞的总RNA,肝细胞是用骨髓干细胞诱导的
提取方法是用trizol提取
大致的步骤是:
1.在1个六孔板中加入1ml,trizol,吹打,吸取液体
2023年02月24日发布人:yysr238