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[size=2]我在RT-PCR实验中提取RNA后,发现一些不该出现强表达的基因,最后PCR产物也有很多。我有些怀疑是否是RNA提取过程中混有DNA。请问RNA混有DNA会出现靶基因PCR产物增多的现象吗?您平时实验中RNA提取后是否常规
2016年02月05日发布人:applebook=213
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都还不错,应该不是引物的问题,你可以从其他方面考虑一下:
1、在你所用实验组织或细胞中有没有这个基因的表达?
2、所提RNA的质量如何?是否尽量避免了RNA酶的污染?
3、内参能否做出来?如果
2015年12月04日发布人:mogu
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)的原核生物,在细胞培养过程中,支原体感染发生率达到63%,因而细胞培养过程中被支原体污染是一个世界性的难题。多篇文献研究表明:当细胞(特别是传代细胞)被支原体污染后,细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变,而细胞的生长率一般并未发生显著的影响,因而细胞被支原体污染一般难以察觉。[/size],[size=2]支原体污染,建议
2016年03月12日发布人:leifengta
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了是什么意思?是跟什么蛋白融合进行表达的,是融合在目的蛋白的N端还是C端?
如果融合能够表达的话那密码子肯定没有问题,我觉得问题出在RNA二级结构的几率比较大。RNA的二级结构尤其是N端的二级结构直接影响着翻译起始效率,尤其是在核糖体结合
2014年05月28日发布人:49888
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模型组,只有和已知量比才能看出目的基因的表达量吧。个人看法,仅供参考······[/size],[size=2]用RT-PCR来比较基因的表达情况吧 先把RNA的量调到一样,多做几次平行实验。[/size],[size=2]
用rt-pcr来比较基因的相对表达情况比较方便吧 做一两次平行实验,简单明了
[/size],[size=2]
同学,你
2015年02月13日发布人:jude
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[size=2]做realtime有段时间了,现在有几个疑问请教大家,
一般提取组织RNA后都会测量浓度,然后根据RNA浓度调整体积,使得进行转录的RNA总量一致,最后得到的cDNA就不再测浓度,直接加1ul进入25ul的
2015年06月03日发布人:中国特色
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这样算的,举个例子,1OD260/280=33ug,RNA提取后测得OD260/280=1.0,那么这个CDNA浓度即是33×1.0=33ug ,一般忽略则RT过程中丢失的量。CDNA的多少主要看你做RT-PCR时你加入RNA的量以及目的
2015年08月31日发布人:hyuu
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感染
不知道有多少人成功用杆状病毒——昆虫细胞表达系统成功进行过蛋白表达?我最近表达一段病毒的非结构蛋白nsp-6,构建的重组Bacmid质粒经PCR鉴定正确,可是进行表达时
2017年04月13日发布人:ffaa
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为什么总是提他们?因为还是很佩服的哦,生怕自己说错了,被他们指出来哦)都谈到了很多,鄙人也充大头答了一些问题,但是还是有各种问题,由于的基因表达还有点实战经验(但也技止此而),所以想些点东西给大家参考,计划把包括RNA酶保护分析
2011年08月12日发布人:王六六
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不会好。[/size],[size=2]
我的目的基因可能是比较低丰度表达怎么办?[/size],[size=2]楼主,虽然RNA可以保存,但是不推荐,因为RNA易降解.
可以考虑,逆转录之后,保存。[/size],[size=2]我这是
2016年04月08日发布人:土坷垃