-
[size=2][font=Verdana]各位大侠我是一个新手,才做PCR不久,遇到不少问题,
⑴Tm=4(G+C)+2(A+T),这G\C\A\T是分别代表它们的数量吗?
⑵如果设计上下游两条引物,但两个Tm值相差很大,一个
2015年11月11日发布人:PCR
-
[size=2]引物退火温度50-60度,taq酶延伸温度72度,那么taq酶延伸的时候部分引物岂不是已经熔开?我也做过一些pcr,但没有想过这个问题,请各位高人帮忙解答。
我看到有人说引物Tm值不要超过72度,这是为什么呢,我觉得
2014年09月25日发布人:四福晋
-
[size=2]请问大家 引物的Tm值和退火温度之间有什么关系 如何选择引物的退火温度啊[/size],[size=2]
退火温度一般是引物的Tm值减去5[/size],[size=2]Tm值减去3-5度[/size],[size=2
2014年09月01日发布人:sistis
-
[size=2]请问各位大虾PCR时TM是看TM(1M Na+)还是TM(0.05M Na+)?P时是不是将其降5-8度?目的基因P不出来只有二聚体出来,是不是引物没设计的好的原因?我该怎么办啊?[/size],[size=2]我也发现
2016年02月09日发布人:bongte
-
[size=2]请教各位师兄师姐:如果一个引物对的两条引物的Tm值不一样,pcr中的Tm值应该参照那个呢?是比较高的还是比较低的?多谢![/size],[quote]原帖由 [i]fei1226com[/i] 于 2015-4-1 16
2015年04月01日发布人:fei1226com
-
[/size],[size=2]
计算退火温度的方法:
1. 退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8) 只是粗算,有时不灵,但比较简便。
2.用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm
2015年07月01日发布人:hulu呼噜
-
[size=4][color=Blue][font=楷体_GB2312]引物的Tm值计算要不要包括不与模板配对的碱基啊 [转载]
由于在引物的5‘端设计酶切位点,但是这部分碱基不与模板配对,那么在计算引物的Tm值时还要不要把这些
2011年09月20日发布人:mooon
-
[size=2]各位大侠,本人做pcr,两个引物Tm值相差甚大,一个66°,一个59.7°,PCR结果一直出不来,请教各位应如何解决这一问题?多谢指点![/size],[size=2]引物一开始设计就出问题了,两个引物TM应该相差不要超过
2015年04月28日发布人:fox_79
-
][/color][/size],[size=4]一般复性温度低于Tm值5度,有杂带的时候甚至升高到高于Tm值几度有时都可以扩增出。有时同一台仪器同样的条件都会有不同的结果。 [/size],[size=4][color=DarkOrchid
2011年10月07日发布人:小螺号
-
,目的基因和杂带有很模糊,什么也看不见了,很是郁闷![/size],[size=2]看来要用降落(TD)-PCR了,就是PCR开始时的退火温度高于Tm值,随着循环的进行,退火温度逐渐降到Tm值并最终低于这个水平。首先在高于引物Tm值的温度扩增几个循环,然后把退火温度逐渐降到两引物的Tm值附近,在随后的循环中,对退火温度进行梯度实验。这样能保证第一引物-
2016年02月09日发布人:了了