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谢谢你的回帖。
我的一抗是中杉的产品,是进口分装的,说明书上建议做WB时稀释比例为1:100到1:1000。另外二抗的比例是实验室老师建议的。
二抗你们一般稀释多少倍?[/color][/size],[s
2014年06月28日发布人:bhka
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[size=2][color=Black][b]最近做WB,几个问题求教高手:
1.因为我的目的蛋白和内参离得很近,均在40kDa左右,想在一张膜上爆出目的和内参,用stripping buffer 洗膜效果不理想,现在想用两种荧光的二
2013年04月11日发布人:紫烟
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就要用4 ul抗体液,你说2 ml就节约?肯定不是。用封闭袋的方法孵育抗体是我推崇的,可以较好的节约抗体。用封闭袋,7个泳道的膜,用抗体稀释液4 ml,按照1:4000稀释一抗,即用1 ul抗体液就够了,你说做一次WB用1 ul抗体原液
2014年03月16日发布人:sr9971
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[size=2][color=Black]请问各位,我怀疑我的一抗二抗出问题了,如何验证啊?之前有位前辈说是用一个确定有用的二抗来验证我的一抗,直接把一抗加在膜上,再加新的二抗,然后显影。请容许我问个很傻的问题,那之前还要跑电泳和转膜
2013年06月01日发布人:土豆potato
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就行。
多多交流![/color][/size],[size=2][color=Black]
TBST可以吗
谢谢[/color][/size],[size=2][color=Black]
我们实验室都是用TBST稀释一抗的
加不加
2014年04月10日发布人:sunnyB
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1、没有封闭或者封闭的不好;
2、一抗(或二抗)没有洗干净;
3、发光液孵育后,发光液没有用滤纸吸干,且用保鲜膜包得不够严密,导致背景太强;
希望对你有用:)[/color][/size],[size=2][color
2013年10月10日发布人:kewanqi2011
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我刚开始准备做WB,因标本收集很难,提的蛋白也较少,请教WB时,转的一张膜上能同时结合两种或更多次一抗吗?或结合一种一抗后,洗3次后再与另一种一抗孵育?(此前需要牛奶封闭吗?)还是显影后再
2014年05月28日发布人:purrr
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各位老师 请问一抗二抗多大比例最好? 刚进实验室,好多都摸不到头绪.[/color][/size],[size=2][color=Black]
每个公司的抗体不一样,所以效价差别非常大,同样
2014年04月16日发布人:dog002
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各位高手,我刚开始做WB,我的分子量是97KD,120V恒压转膜转2个小时45分钟,转完膜后立春红染色有条带,用5%脱脂奶粉(TBST稀释)室温封闭两小时,用碧云天的一抗稀释液稀释一抗
2013年07月26日发布人:jingling845
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我做wb的时候,条带出来过两次,现在连续三次做不出来了,跑胶跟转膜应该没有问题的,我用丽春红染色膜上的蛋白条带是有的,跟前几天做出来用的一抗,二抗,发光剂是一样的.一抗跟二抗的浓度也是一样的
2014年04月05日发布人:jkobn