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液含20%甲醇。转膜结束后膜上marker非常淡,几乎看不清。。。
请教WB高手,是不是转的时间太长了?这个分子量的转膜时间多长合适?
但是前后滤纸上我并没有看到marker的彩色条带啊。。。[/font][/color][/size
2013年05月13日发布人:star#room
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未见条带,请高手指点!不胜感激![/color][/size],[size=2][color=Black]
pvdf膜转膜前需要比较严格的处理程序,包括用甲醇浸泡20min后再用转膜缓冲液浸泡等等,你可以在网上查查pvdf膜处理的程序再看
2014年02月22日发布人:小野花
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刚定的PVDF膜不知道怎麽用,请大家指点指点![/color][/size],[size=2][color=Black]
同问,我一个以前专做wb的同学说先用甲醇泡一分钟,老板说直接泡电转液
2014年06月27日发布人:kulee
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,借助丁香园的强势人气,此举可以提高我国一线科研人员WB水平也未必。我认为不用摸转摸条件的话,WB的效率提高数倍不成问题。
请大家多多提供一线转膜经验
也请园子里管事的兄弟姐妹多思量,我希望可以发起一个全园子的征集计划,由本板块版主
2013年05月16日发布人:woshiduiyan
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最近在做WB,目的蛋白分子量80KD ,用5%浓缩胶,10%的分离胶,用70V在浓缩胶中跑30min左右,120V在分离胶中跑70min左右,电泳中MARKER跑的很漂亮,条带也很清晰
2014年01月15日发布人:applebook=213
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我用的是amershem公司的Mini电泳槽,做WB用的是全湿法
缓冲液是25 mM Tris, 192 mM 甘氨酸, 20% (v/v)甲醇 (pH 8.3);
胶大概是8cm x
2014年06月28日发布人:bangqi_k
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我最近开始学习WB,电泳完成后,maker的条带很清楚,由于切胶技术不好,就把上层胶切掉后全部转膜,250mA转膜2h30min后停止,发现PVDF膜上基本没有maker的痕迹,凝胶上也没有
2013年05月13日发布人:雪花子
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中甲醇的量,因为它是用来洗脱蛋白上结合的SDS的,而SDS多了很可能就转不上膜.一般甲醇量在15%左右.另外PVDF膜要用甲醇浸透,并且平衡时间一
2014年07月01日发布人:docsy
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我在做WB,有两个目的蛋白,分子量分别为32kd,36kd,分子量很是靠近,以前我们裁膜的时候由于分子量很接近,所以每次一块胶只能做一个指标,既浪费时间,也浪费试剂,我最近想了一下,可不可以不
2014年02月03日发布人:uuooii
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请教,为什么 不加 甲醇?
我们用300mA,2h,湿转 ,北京六一的,效果不错[/color][/size],[size=2][color=Black]大分子量蛋白不加,因为大家用的膜都是0。46um孔径的
2013年11月09日发布人:taoshengyijiu