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[size=2][color=Black]请教大家
western转膜之后,封闭之前要不要洗膜?还是转完之后直接放在封闭液里?这样的话转移缓冲液中的甲醇会不会有影响?
再有,封闭之后,上一抗之前要不要洗?
谢谢大家![/color
2014年01月19日发布人:摆渡客
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除了抗体原因,转膜是怕是western成败的最关键因素。
看到园子里好多好多人在求助转膜时间,园子为何总结出一系列分子量蛋白转膜的时间呢?少说这对于大多数新手来说,是极好的礼物,说大点
2013年05月16日发布人:woshiduiyan
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western blot转膜是,两侧的滤纸能直接接触吗?我裁的滤纸比胶大,导致两侧滤纸直接接触了,这会导致转膜不成功吗?我最近的转膜都不成功,不知道是不是这个原因?请教高手,谢谢
2013年06月03日发布人:鲇鱼少爷
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在western转膜时,要把滤纸剪的比膜小一些,据说是为了防止短路,因为滤纸大些的话,电流会绕过胶和膜,可是我有一些不明白的是,那海绵比滤纸,胶,膜都大,难道不会引起短路吗?望哪位大侠能给
2014年06月17日发布人:orangecake
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各位老师,我做western转膜之后,发现膜上什么条带都没有,marker一条带都没有,这可能是什么原因呢。很困惑,谢谢大家![/color][/size],[size=2][color
2014年03月08日发布人:131415
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第一次做Western blot,之前摸索过电泳,转膜的条件,染色后显示转膜比较成功,条带清晰,昨天转膜后用5%脱脂牛奶进行封闭,室温2h,随后洗膜5min*3次,用封闭液稀释一抗1
2013年05月23日发布人:土豆potato
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这两天做Western Blot ,转膜后用立春红S染液染色5min,用TBST脱色,发现脱色非常迅速,我还没来得及看清条带,蛋白条带就已经看不见了,这是问什么啊?我染色5min后,到去染液
2014年03月26日发布人:applebook=213
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最近做western blot ,电泳,转膜感觉没问题,转出的膜用丽春红染色,条带清晰,用5%的脱脂奶粉封闭1小时,加一抗,一抗用TBS稀释,另加5%BSA,4度过夜,用
2013年10月09日发布人:ilovegaga
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胶考染是很正常的,没有像Western那样的扭曲条带。[/color][/size],[size=2][color=Black]
我们转膜用的都是恒流啊 350mA 90MIN 你可以试一下·![/color][/size],[size
2014年05月23日发布人:youreyes
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,指引我走向失败。
第一张图是最开始曝的,第三张是过了一段时间曝的。中间一张是内参,似乎和目的蛋白是一样的情况。
[/color][/size],[font=黑体][size=2][color=Black]转膜条件基本可以
一抗与二抗浓度均较高
建议:先做二抗的稀释度(同时不同的ECL均需
2013年07月20日发布人:NBA