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新手做qRT-PCR,迂到困难,请各位战友不吝赐教,不胜感谢!
质粒转染细胞后提取总RNA,反转录得到cDNA做模板,SYBR green法定量PCR,但发现内参(beta-actin)的Ct值高于目的基因的Ct。即
2023年02月24日发布人:woshi
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查文献,问专家和药曲,生物样品的精密度试验有以下几种做法,到底应选择哪一种?
1 药典:日内:要求选择三个浓度的质控样品,低浓度在定量下限的三倍以内,中浓度在中间,高浓度接近定量上限。每个测定5次。
日间:同样浓度
2010年07月23日发布人:shzyxq
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Ct都在33以上。[/size],[size=2]
不是33吧?
是37吧?[/size],[size=2]
假如PCR的循环数是40个左右的话,CT值在33 (也就是10的三次方左右),这样低的拷贝数就很难确定是标本本身的CT或是
2015年07月01日发布人:黄花菜
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问题:1、取样品0.3g,0.30g,0.300g,精密称定。数字3后面跟的0到底有没有意义?看到有的帖子说,只要用了精密称定,后面不论有多少个0都不需要写。这种说法到底对不对?大家来讨论一下!
2、取样品20g,精密称定,使用什么精度
2015年12月19日发布人:大大
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[size=2]小弟最近在做荧光定量PCR,发现无论是actin还是目的基因的CT值都很高(30多),目的基因30多也就罢了,actin不会这么高啊! 我先后做过以下调整:
1、增加模板浓度,稀释10倍、5倍、2倍,不稀释的都试过
2015年07月03日发布人:铜雀
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问题:1、取样品0.3g,0.30g,0.300g,精密称定。数字3后面跟的0到底有没有意义?看到有的帖子说,只要用了精密称定,后面不论有多少个0都不需要写。这种说法到底对不对?大家来讨论一下!
2、取样品20g,精密称定,使用什么精度
2016年04月18日发布人:妮子@
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取10mgxx对照品,精密称定,但是分析给我的数据有9.9mg,10.0mg类似的数据。一看他们是用万分之一天平称量的。根据USP中说法,减重法十万分之一天平最小称样量为20mg,增重法为10mg,且不说减重还是增重,也不说USP,学过
2016年01月01日发布人:无怨无悔
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表达的改变,RT 和real time PCR 的kit都是TAKARA,PCR结果让我更是糊里糊涂,内参的CT值(30~33)竟然比所有的基因ct值(28~32)都高,不知道什么原因,也不知道哪步出错了.荧光定量PCR完我把所有的孔拿回来
2015年12月04日发布人:bring
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[color=Olive][size=4][font=楷体_GB2312][b]请问荧光定量(相对定量)比较Ct中如何计算扩增效率[转自 丁香园论坛]
我用 Analysis of Relative Gene
2011年08月24日发布人:还是孩子
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我是做荧光定量的新手,今天发现,Ct值都很大,超过30,且溶解曲线的峰值出现在60-70之间,扩增片段不超过200.不知道为什么,跑琼脂糖电泳后发现均有带,如果是表达量少的话,这样的结果可靠吗?[/size
2016年01月08日发布人:yes4